影響ELISA試驗(yàn)效果常見(jiàn)問(wèn)題原因分析及解決辦法
ELISA試驗(yàn)以靈敏度較高、特異性較好的特點(diǎn)在臨床上得到了廣泛的應(yīng)用，但操作中的各個(gè)環(huán)節(jié)對(duì)試驗(yàn)的檢測(cè)效果影響較大，如不注意，有可能導(dǎo)致顯色不全、花板等結(jié)果。我將操作中各個(gè)環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問(wèn)題的原因及解決辦法總結(jié)于下，以期給同行帶來(lái)一些啟發(fā)，提高試驗(yàn)質(zhì)量。
操作步驟 | 可能原因 | 解決辦法 |
選擇試劑 | 選擇質(zhì)量?jī)?yōu)良的檢測(cè)試劑，嚴(yán)格按照試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。 |
加 樣 | 1.血清或血漿標(biāo)本分離不好即進(jìn)行加樣； 2.手工操作中，加樣板過(guò)多造成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))； 3.加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺出孔外。 | 1.標(biāo)本為血清：將血液先自然存放1-2小時(shí)后，再用3000rmp離心15分鐘；標(biāo)本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標(biāo)本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時(shí)間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內(nèi)檢測(cè)，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內(nèi)。 2.加樣后及時(shí)放入孵箱。 3.加酶試劑后用吸水紙?jiān)诿笜?biāo)板表面輕拭吸干。 4.如果采用AT或其他全自動(dòng)加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5.標(biāo)本較多時(shí)，請(qǐng)分批操作。 |
孵 育 | 1.孵育時(shí)未貼封片或加蓋，使標(biāo)本或稀釋液蒸發(fā)，吸附于孔壁，難于清洗*； 2.孵育時(shí)間人為延長(zhǎng)，導(dǎo)致非特異性結(jié)合緊附于反應(yīng)孔周圍，難以清洗*。 | 1.貼封片或加蓋； 2.按說(shuō)明步驟嚴(yán)格控制操作時(shí)間。 |
洗 板 | 1.采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2.采用半自動(dòng)洗板機(jī)洗板時(shí)，洗液量不足，導(dǎo)致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導(dǎo)致洗板效果差。 3.反應(yīng)板過(guò)多造成洗板等待時(shí)間長(zhǎng)。 | 1.保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無(wú)或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 2.合理安排，或多用幾臺(tái)洗板機(jī)。 |
顯 色 | 1. 顯色劑配制后放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或使用過(guò)期顯色劑； 2. 加顯色劑時(shí)濺出孔外造成液體回流。 | 1. 顯色劑盡量在臨用前配制，堅(jiān)持不用過(guò)期顯色劑，肉眼可見(jiàn)淺藍(lán)色的TMB顯色劑不用； 2. 加樣時(shí)保持顯色劑不外流； 3.A、B液應(yīng)避免接觸金屬器械。 |
終 止 | 加終止液時(shí)產(chǎn)生較多氣泡，導(dǎo)致假陽(yáng)性增加。 | 加終止液時(shí)應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。 |
讀 板 | 讀板時(shí)板底不清潔。 | 應(yīng)保證酶標(biāo)板清潔。 |
全過(guò)程 | 1.整個(gè)操作過(guò)程中保證酶標(biāo)板不接觸次氯酸; 2.實(shí)現(xiàn)ELISA檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)自動(dòng)化，有效提高檢測(cè)質(zhì)量。 |
在實(shí)際操作中，除了選擇優(yōu)良試劑外，必須嚴(yán)格按照操作步驟進(jìn)行操作，同時(shí)作好室內(nèi)質(zhì)控、室間質(zhì)評(píng)，以嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ髯黠L(fēng)檢測(cè)每一份標(biāo)本，才能保證檢測(cè)質(zhì)量?，F(xiàn)在國(guó)內(nèi)已有相當(dāng)數(shù)量的單位擁有全自動(dòng)酶標(biāo)儀，這對(duì)于實(shí)現(xiàn)ELISA標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)、提高檢測(cè)質(zhì)量起到了重要作用。
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