科研研究伏馬毒素B1ELISA檢測試劑盒

原理及用途
伏馬毒素(Fumonisins)是由串珠鐮刀菌產(chǎn)生的真菌毒素，目前已知有28種衍生物，其中以伏馬毒素B1（FB1）普遍，研究深入，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)玉米及其制品，如動(dòng)物飼料均易被FB1造成污染。FB1毒性在伏馬毒素，對(duì)多種動(dòng)物有較嚴(yán)重的毒理作用。研究表明FB1可引發(fā)馬的白腦軟化癥，豬的肺水腫綜合癥，此外，還可誘發(fā)人類的食道癌和肝癌、胃癌等疾病，對(duì)畜牧業(yè)和人類的健康構(gòu)成危害。試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測時(shí)，加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液，樣本中的伏馬毒素B1和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競爭抗伏馬毒素B1抗體，加入酶標(biāo)記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含伏馬毒素B1含量成負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較乘以樣本稀釋倍數(shù)即可得出樣本中伏馬毒素B1的殘留量。

科研研究伏馬毒素B1ELISA檢測試劑盒

技術(shù)指標(biāo)
2.1 試劑盒靈敏度：0.5ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式：25℃，30min～15min
2.3 檢測下限：
玉米、飼料…………………………50ppb
食用油………………………………10ppb
2.4 交叉反應(yīng)率：
伏馬毒素B1…………………………100%
 2.5 樣本回收率：
飼料…………………………………95±15%
玉米…………………………………100±15%
食用油………………………………85±15%

5.3.1 玉米、飼料處理方法 

1）稱取1g粉碎樣品于50ml離心管中，加5ml樣品提取液，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；

2）取上清0.1ml，加入1.9ml復(fù)溶液，振蕩2分鐘；

3）取50μl進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù)：100   檢測下限：50ppb

（若樣本中伏馬毒素B1的含量較高，可在步驟2）按比例增大稀釋倍數(shù)，檢測出的含量乘以樣本實(shí)際的稀釋倍數(shù)即為樣本中的含量）

5.3.1 食用油處理方法

1）稱取5ml樣品于50ml離心管中，加8ml正己烷和5ml樣品提取液，振蕩5分鐘，室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘；

2）去除上層液體，取100ul下層液體加入1.9ml復(fù)溶液，混勻；

3）取50μl進(jìn)行分析。

樣本稀釋倍數(shù)：20      檢測下限：10ppb

6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟

    將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

6.1 編    號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。

6.2 加樣反應(yīng)：加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記物50µl/孔，再加入50µl/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩5秒混勻，25℃反應(yīng)30分鐘。

6.3 洗    滌：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次，每次間隔30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

6.4 顯    色：每孔加入底物液A 50µl，再加底物液B 50µl，輕輕振蕩5秒混勻，25℃避光顯色15分鐘（若藍(lán)色過淺，可適當(dāng)延長反應(yīng)時(shí)間）。 

6.5 終    止：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，終止反應(yīng)。

6.6 測吸光值：用酶標(biāo)儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）。測定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。

7 結(jié)果分析

7.1 百分吸光率的計(jì)算

    標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液（0ppb）的吸光度值，再乘以100%，即

 百分吸光度值（%）＝ A ×100%

A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算

    以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度（ppb）的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測物的實(shí)際濃度。

    若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。