腹瀉性貝類毒素檢測(cè)試劑盒的原理是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法，用于水及水產(chǎn)品中腹瀉性貝類毒素的定量測(cè)定。岡田酸是腹瀉性貝類毒素的一種。對(duì)于水產(chǎn)品需要做前處理，不可以直接檢測(cè)。如果需要的話陽性樣品可以通過HPLC和GC/MS來驗(yàn)證。

試劑盒的原理是直接競爭ELISA法，通過特異性抗體來識(shí)別岡田酸。當(dāng)樣品中含有岡田酸時(shí)，樣品中的岡田酸與岡田酸酶結(jié)合物競爭結(jié)合溶液中的岡田酸抗體。岡田酸抗體與包被在微孔板上的羊抗鼠二抗結(jié)合。經(jīng)過一步洗滌加入底物溶液，產(chǎn)生有色反應(yīng)。產(chǎn)生的綠色的顏色深度與樣品中岡田酸的含量成反比。加入反應(yīng)停止液后使顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)定吸光度值。通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線來計(jì)算樣品中岡田酸的含量。

重復(fù)性：標(biāo)準(zhǔn)的變異系數(shù)小于10%，樣品的變異系數(shù)小于15%

腹瀉性貝類毒素檢測(cè)試劑盒能檢測(cè)Okadaic acid及其它DSP，它們的結(jié)合程度是不同，以下表格中展示的是相關(guān)值及交叉反映率（%CR），以下所有濃度均為ppb級(jí)。

 

樣品：水樣和貝類產(chǎn)品

3、岡田酸抗體溶液（兔抗岡田酸）6ml

4、岡田酸酶標(biāo)記物6ml

5、樣品稀釋液（10倍濃縮）25ml，用于稀釋樣品

6、5x 濃縮洗液100ml

1、在對(duì)應(yīng)的微孔中加入100μL的標(biāo)準(zhǔn)和樣品（*做2-3個(gè)重復(fù)）

2、每個(gè)測(cè)試孔都加入50 μL岡田酸酶標(biāo)記物溶液。

3、每個(gè)測(cè)試孔都加入50 μL岡田酸抗體溶液，用封口膜把微孔板蓋上，輕輕的震蕩微孔板30秒使里面的液體混勻。不要使液體灑出。

4、在室溫下孵育60分鐘。

5、孵育完成后，把封口膜取掉，將微孔中的溶液用力地倒入水槽中，用1 X的洗液洗板3次，每孔每次至少加入250 μL1 X的洗液。拍板，去掉殘留的洗液。

6、每個(gè)測(cè)試孔加入150μL的顯色液（底物）。室溫孵育20-30分鐘，此步驟避免太陽光照射。

7、每個(gè)測(cè)試孔加入100μL終止液。

8、用酶標(biāo)儀在450nm 下讀取每個(gè)孔的吸光度值（OD）（在加入終止液15分鐘內(nèi)完成）。

結(jié)果分析可以利用商業(yè)ELISA分析軟件（4-parameters,Logit/Log）。手工計(jì)算可以先計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值的平均值，然后計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的%B/B0（用其它標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值除以零標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值乘以*）。以每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的%B/B0做Y軸，以每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的岡田酸的濃度做X軸構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過利用標(biāo)準(zhǔn)曲線，把樣品的%B/B0代入標(biāo)準(zhǔn)可以計(jì)算出樣品中岡田酸的濃度。樣品中岡田酸的含量小于0.1 ppb認(rèn)為陰性。當(dāng)樣品中岡田酸的含量大于5.0 ppb要稀釋后再測(cè)定。

可以利用商業(yè)ELISA軟件程序比如Logit/Log or 4-Parameter 來評(píng)價(jià)ELISA結(jié)果。也可以通過計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的%B/B0值，以%B/B0為y軸、呋喃唑酮為x軸作一標(biāo)準(zhǔn)曲線。樣品濃度可以通過標(biāo)準(zhǔn)曲線來計(jì)算。當(dāng)樣品中的呋喃唑酮濃度低于標(biāo)準(zhǔn)1（0.0125 ng/mL）時(shí)，認(rèn)為樣品中呋喃唑酮的濃度小于0.05 ppb。樣品表現(xiàn)的濃度高于標(biāo)準(zhǔn)6（0.5 ng/mL）時(shí)要經(jīng)過稀釋后再測(cè)定。