①酶解法:酶解法是實驗室普遍使用的大腸桿菌破壁的方法,溶菌酶可以直接對大腸桿菌破壁,但酶的使用較為昂貴,增添了成本,同時溶菌酶的存在可能會干擾重組蛋白的功能。
②化學(xué)滲透法:化學(xué)滲透是指借助跨膜電化學(xué)質(zhì)子梯度來驅(qū)動分子逆濃度梯度跨膜的耗能過程,對大腸桿菌的破碎效率很低,進而顯著影響蛋白質(zhì)的提取。
③機械法:機械法是指借助外部剪切力對大腸桿菌實施物理層面的破壁,直接釋放胞內(nèi)蛋白。機械法對設(shè)備的要求比較高,合適的剪切力才能既破壁又保證蛋白質(zhì)的生物活性。
②變頻流量控制系統(tǒng),按需流量可調(diào)。
③數(shù)顯壓力傳感系統(tǒng),可選配實時壓力曲線監(jiān)測系統(tǒng)。
1.準(zhǔn)備高壓均質(zhì)機、冷水機、離心機、根據(jù)實驗量取合適的均質(zhì)機料杯,以及適量桿菌液體。
2.將2根膠管把冷水機的進出水口與主機的出料冷卻器進行連接。
3.將冷水機提前20分鐘打開預(yù)冷,溫度設(shè)置2度。
4.待冷水機溫度達到實驗均質(zhì)要求后,往料杯倒入大腸桿菌進行均質(zhì),循環(huán)次數(shù)為5次,壓力為1000bar。
5.完成均質(zhì)后,將液體放入離心管中進行離心,根據(jù)實驗對象進行離心轉(zhuǎn)速設(shè)置,完成離心后取出離心管,即可進行后續(xù)實驗。
6.儀器均質(zhì)完成后,均質(zhì)機需加清水進行清洗,清洗完畢后,往料杯口加入75度酒精進行封存,防止細菌滋生,以備下次使用。
實驗后

離心后

2、設(shè)備運行過程中,進料要求穩(wěn)定、均一、且不可間斷。
3、使用時應(yīng)盡量避免泵體內(nèi)吸入空氣。
4、使用結(jié)束后,往料杯倒入75%酒精進行封存。
TIPS: 高壓均質(zhì)機是一款利用高壓泵將物料加壓至一定壓力后,通過均質(zhì)閥的狹窄縫隙,使物料在高壓下受到剪切、沖擊和空穴效應(yīng)等作用,從而達到均質(zhì)、乳化和破碎等目的的設(shè)備。具有壓力高、體積小、操作便捷、處理效率高等特點;應(yīng)用于制藥、生物工程、食品、精細化工等領(lǐng)域。