大腸桿菌破壁的方法

①酶解法：酶解法是實驗室普遍使用的大腸桿菌破壁的方法，溶菌酶可以直接對大腸桿菌破壁，但酶的使用較為昂貴，增添了成本，同時溶菌酶的存在可能會干擾重組蛋白的功能。

②化學滲透法：化學滲透是指借助跨膜電化學質(zhì)子梯度來驅動分子逆濃度梯度跨膜的耗能過程，對大腸桿菌的破碎效率很低，進而顯著影響蛋白質(zhì)的提取。

③機械法：機械法是指借助外部剪切力對大腸桿菌實施物理層面的破壁，直接釋放胞內(nèi)蛋白。機械法對設備的要求比較高，合適的剪切力才能既破壁又保證蛋白質(zhì)的生物活性。

高壓均質(zhì)機有如下優(yōu)點：

①單支陶瓷柱塞驅動，出料流量可控制。

②變頻流量控制系統(tǒng)，按需流量可調(diào)。

③數(shù)顯壓力傳感系統(tǒng)，可選配實時壓力曲線監(jiān)測系統(tǒng)。

④樣品殘留量：零殘留。

實驗案例：

1.準備高壓均質(zhì)機、冷水機、離心機、根據(jù)實驗量取合適的均質(zhì)機料杯，以及適量桿菌液體。

2.將2根膠管把冷水機的進出水口與主機的出料冷卻器進行連接。

3.將冷水機提前20分鐘打開預冷，溫度設置2度。

4.待冷水機溫度達到實驗均質(zhì)要求后，往料杯倒入大腸桿菌進行均質(zhì)，循環(huán)次數(shù)為5次，壓力為1000bar。

5.完成均質(zhì)后，將液體放入離心管中進行離心，根據(jù)實驗對象進行離心轉速設置，完成離心后取出離心管，即可進行后續(xù)實驗。

6.儀器均質(zhì)完成后，均質(zhì)機需加清水進行清洗，清洗完畢后，往料杯口加入75度酒精進行封存，防止細菌滋生，以備下次使用。

實驗前

實驗后

離心后

注意事項：

1、嚴禁在無物料的情況下帶壓空運行。

2、設備運行過程中，進料要求穩(wěn)定、均一、且不可間斷。

3、使用時應盡量避免泵體內(nèi)吸入空氣。

4、使用結束后，往料杯倒入75%酒精進行封存。

TIPS: 高壓均質(zhì)機是一款利用高壓泵將物料加壓至一定壓力后，通過均質(zhì)閥的狹窄縫隙，使物料在高壓下受到剪切、沖擊和空穴效應等作用，從而達到均質(zhì)、乳化和破碎等目的的設備。具有壓力高、體積小、操作便捷、處理效率高等特點；應用于制藥、生物工程、食品、精細化工等領域。