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上海禾工科學(xué)儀器有限公司

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三環(huán)抗抑郁劑固相萃取凈化方法

2010-6-25 

3mL,Bond Elut Certifi 130mg. PN.12102051

 

三環(huán)抗抑郁劑固相萃取凈化方法

1. 樣品制備

A . 血漿或血清

用 1.0mol/L KOH 溶液調(diào)節(jié) pH 值至 6.0 ± 0.5 1mL 血漿或血清中加入 4mL 100mmol/L磷酸鹽緩沖液( pH6.0 充分混合。

B. 全血

充分混合,1mL 血液中加入 2mL 甲醇。離心去除蛋白沉淀;

加入 10mL 100mmol/L 磷酸鹽緩沖液( pH6.0 充分混合,取上清液。將用 1.0mol/L KOH 溶液調(diào)節(jié)pH 值至 6.0 ± 0.5

2. SPE 凈化

2mL 去離子水和 1mL 100mmol/L 磷酸鹽緩沖液( pH6.0 分別沖洗柱床; a. 活化:用 2mL 甲醇。

注意:要保證吸附劑不干燥;

b. 上樣:上樣流速控制在 1~2mL/min

1mL1.0mol/L 醋酸和 3mL 甲醇分別淋洗,c. 淋洗:分別用 3mL 去離子水。zui后將 SPE 柱抽 5min至干燥;

d. 洗脫:用 2mL 二氯甲烷 / 異丙醇 / 氨水( 78:20:2 以 1~2mL/min 速度進(jìn)行洗脫。收集全部洗脫液;

注意:洗脫液必需為當(dāng)天新制備的新鮮溶液。

3. 蒸發(fā)干燥

將洗脫液在 40 ℃ 以下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至干

4. 檢測方法

GC-NPD 或者 GC-MS 分析

衍生化

70 ℃ 反應(yīng) 20min 冷卻至室溫,用 50 μ L 乙酸乙酯溶解蒸發(fā)后的樣品 加入 50 μ L 五氟丙酰酸酐( PFPA充氮?dú)獠⒚芊狻U舭l(fā)至干; 100 μ L 乙酸乙酯定容

非衍生化方法

用 100 μ L 甲醇重新定容;進(jìn) 1~ 3 μ L 測定; 沒有衍生化的樣品也可以直接進(jìn)行分析。

LC 檢測

用 200 μ L 乙腈 / 去離子水( 25:75 定容,將第 3 步中的樣品。用漩渦混合器混合 30 進(jìn) 100 μ L測定。

5. 樣品成分

三環(huán)抗抑郁劑

本方法中使用的固相萃取裝置



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