【參數(shù)信息】
英文名稱:Fluorescein ConA;ConA-FITC;Fluorescein- Concanavalin A
中文名稱:FITC標記刀豆球蛋白A ;FITC-刀豆蛋白A;熒光素標記刀豆球蛋白A
【簡單概述】(熒光素標記刀豆球蛋白A)
Con A recognizes alpha-linked mannose as a "core oligosaccharide" present in many serum and membrane glycoproteins.
Fluorescein labeled Con A has the appropriate amount of fluorescent dye binding to provide the best staining properties for this lectin.
This conjugated substance basically does not contain unconjugated fluorescent dyes.
Con A 將 α 連接甘露糖識別為存在于許多血清和膜糖蛋白中的“核心低聚糖"。
熒光素標記的 Con A 具有適量的熒光染料結(jié)合,可為該凝集素提供的染色性能。
Fluorescein ConA(異硫氰酸熒光素標記的刀豆蛋白A)是一種重要的生物化學探針,由刀豆蛋白A(Concanavalin A, ConA)與熒光素(如FITC)通過共價結(jié)合形成。
其技術(shù)背景源于糖生物學和細胞表面標記研究的進展,旨在實現(xiàn)對細胞表面糖基化結(jié)構(gòu)的特異性熒光標記與可視化監(jiān)測。
【Fluorescein ConA作為親和探針,是如何通過ConA-瓊脂糖柱分離富集含甘露糖/葡萄糖的糖蛋的?分析一下原理和步驟】
ConA是一種植物凝集素,可特異性識別并結(jié)合α-D-甘露糖、α-D-葡萄糖及其衍生物。
每個ConA四聚體含有4個糖結(jié)合位點,需依賴Ca2?和Mn2?維持結(jié)合活性。
Fluorescein ConA中的熒光素標記(如FITC)不干擾糖結(jié)合活性,但賦予探針熒光特性,便于后續(xù)檢測(如熒光顯微鏡或流式細胞術(shù))。
在分離過程中,熒光標記主要用于示蹤或驗證結(jié)合效率,而非直接參與分離。
ConA通過共價鍵固定在瓊脂糖微球上,形成ConA-瓊脂糖柱。當樣品流過層析柱時,含甘露糖/葡萄糖的糖蛋白與固定化ConA特異性結(jié)合,其他非靶標蛋白被洗脫。隨后通過競爭性洗脫(如添加游離甘露糖)釋放目標糖蛋白。
將ConA-瓊脂糖凝膠填充至層析柱,用結(jié)合緩沖液平衡,以激活ConA的糖結(jié)合位點。
將樣品(如細胞裂解液或血清)加載至柱中,含甘露糖/葡萄糖的糖蛋白與ConA特異性結(jié)合,非結(jié)合成分通過洗滌緩沖液(如平衡緩沖液)去除。
使用競爭性洗脫緩沖液(如含200 mM α-甲基甘露糖苷或葡萄糖苷的緩沖液)解離結(jié)合糖蛋白。游離糖與ConA競爭結(jié)合位點,釋放目標糖蛋白。
收集的洗脫液可通過熒光檢測(若使用Fluorescein ConA作為探針示蹤)或Western blot、質(zhì)譜進一步分析糖蛋白組成。
【相關(guān)試劑】
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