【參數(shù)信息】
【簡單概述】
MitoLite Green FM is the same molecule to the MitoTracker Green FM (M7514, ThermoFisher).
It is green-fluorescent mitochondrial stain.
Unlike other MitoLite probes, MitoLite Green FM appears to localize to mitochondria, much less depending on mitochondrial membrane potential.
The dye stains live cells, but it is not well-retained after aldehyde fixation.
MitoLite Green FM 與 MitoTracker Green FM（M7514，ThermoFisher）的分子相同。
與其他 MitoLite 探針不同，MitoLite Green FM 似乎定位于線粒體，更不用說依賴線粒體膜電位了。
MitoLite 是一種用于特異性標記和成像線粒體的熒光染料，其核心結構基于菁染料（carbocyanine）衍生物，包含疏水性陽離子基團、氯甲基反應基團和熒光發(fā)色團。
疏水性陽離子部分：負責通過被動擴散穿透細胞膜，并依賴線粒體膜電位梯度（ΔΨM）在線粒體基質中富集。
氯甲基基團：作為弱巰基反應性基團，可與線粒體蛋白中的半胱an酸殘基共價結合，增強標記穩(wěn)定性。
熒光發(fā)色團：典型結構為菁染料骨架，賦予探針綠色熒光特性，激發(fā)/發(fā)射波長約 490–508 nm/516–528 nm。
【MitoLite 線粒體綠色熒光探針，凋亡檢測的原理和方法是什么？】
MitoLite是一種基于膜電位依賴機制的熒光染料，用于檢測細胞凋亡過程中的線粒體功能變化。
其原理在于：該探針為疏水性陽離子化合物，可穿透細胞膜并選擇性累積在線粒體基質中；在線粒體膜電位正常時，探針聚集并發(fā)出綠色熒光，而凋亡早期線粒體膜電位下降會導致探針以單體形式分散，熒光強度減弱或分布改變，從而反映凋亡狀態(tài)。
探針準備：將 MitoLite Green 溶解于 DMSO 后稀釋至工作濃度（通常為微摩爾級），避光保存。
細胞染色：棄去細胞培養(yǎng)液，加入預熱的 PBS 清洗后，加入含探針的培養(yǎng)液，37°C 孵育 15-30 分鐘。
清洗與觀察：用 PBS 清洗未結合的探針，更換無酚紅培養(yǎng)基，立即通過熒光顯微鏡（使用 FITC/GFP 濾光片）或流式細胞術（488 nm 激發(fā)，510-530 nm 檢測）觀察綠色熒光信號。
數(shù)據分析：正常細胞呈現(xiàn)明亮、聚集的線粒體熒光，凋亡細胞則熒光強度減弱或分布彌散，可通過熒光強度定量或形態(tài)學對比判斷凋亡程度。
該方法適用于活細胞動態(tài)監(jiān)測，但需注意避免光照導致淬滅，并排除非凋亡性線粒體損傷的干擾。
【相關試劑】
Alexa Fluor 546 NHS Ester
Alexa Fluor 568 NHS Ester
Alexa Fluor 568 NHS Ester
iFluor 810 acid iFluor 810 酸
AF350 酪胺(XFD350 tyramide reagent)
Buccutite RPE抗體標記試劑盒 標記100ug抗體
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