【參數(shù)信息】（AF 568 刀豆蛋白A）
英文名稱：AF 568 ConA；Alexa Fluor 568 Concanavalin A
【簡單概述】（AF 568 刀豆蛋白A）
刀豆蛋白A（ConA）是從刀豆（Canavalia ensiformis）中提取的一種凝集素（lectin），自20世紀中期以來被廣泛用于糖生物學(xué)和免疫學(xué)研究。
其核心特性是特異性識別并結(jié)合糖類結(jié)構(gòu)（如α-D-甘露糖和α-D-葡萄糖殘基），常用于細胞表面糖蛋白標記、免疫調(diào)節(jié)研究和糖復(fù)合物純化。
隨著熒光標記技術(shù)的發(fā)展，ConA被與多種熒光染料（如Alexa Fluor系列）偶聯(lián)，以增強其在顯微成像和流式細胞術(shù)中的應(yīng)用。
AF568 ConA是其中一種常見變體，結(jié)合了AF568染料的高亮度、光穩(wěn)定性和pH不敏感性（pH 4-10）。AF568 ConA是一種復(fù)合物。
刀豆蛋白A（ConA）：一種四聚體蛋白（分子量約104 kDa），依賴鈣離子/錳離子激活，特異性結(jié)合α-D-甘露吡喃糖和α-D-葡萄吡喃糖殘基。
Alexa Fluor 568染料：一種磺化水溶性橙色熒光染料，激發(fā)/發(fā)射波長約為578/603 nm，具有高量子產(chǎn)率、抗光漂白性和寬pH穩(wěn)定性。
該復(fù)合物通過共價偶聯(lián)（如NHS酯反應(yīng)）形成，用于標記細胞表面的糖基化結(jié)構(gòu)（如糖蛋白、糖脂），適用于活細胞或固定樣本的熒光成像。
【AF 568 ConA的細胞表面標記與成像是怎樣的？】
特異性結(jié)合：ConA能夠特異性識別并結(jié)合細胞表面的α-D-甘露糖和α-D-葡萄糖殘基（常見于糖蛋白和糖脂的末端結(jié)構(gòu)），因此可標記細胞膜表面的糖基化修飾。
熒光特性：Alexa Fluor 568是一種橙紅色熒光染料，激發(fā)波長為578 nm，發(fā)射波長為600 nm，具有高亮度、光穩(wěn)定性和pH穩(wěn)定性，適用于多色熒光成像。
細胞培養(yǎng)：將細胞接種于蓋玻片或培養(yǎng)板中，待生長至合適密度。
若需標記細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)（如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)），需先固定（如3.7%甲醛，10分鐘）和透膜（0.1% Triton X-100，5分鐘）。
若僅標記細胞表面，可跳過透膜步驟，直接使用活細胞或固定后非透膜樣本。
工作液配制：將AF 568 ConA溶解于緩沖液（如PBS或含1% BSA的緩沖液），典型工作濃度為50–200 μg/mL。
孵育：將工作液覆蓋樣本，室溫避光孵育10–30分鐘（活細胞）或延長至1小時（固定樣本）。
清洗：用緩沖液（如PBS）洗滌2–3次，去除未結(jié)合探針。
顯微鏡設(shè)置：使用熒光顯微鏡或共聚焦顯微鏡，選擇Cy3/TRITC濾光片組（激發(fā)波長約568 nm，發(fā)射波長約600 nm）。
多色成像：AF 568 ConA的橙紅色信號可與其他熒光探針（如DAPI、FITC）搭配，用于多通道成像。
細胞凋亡研究（與Annexin V等聯(lián)用）；
細胞繪畫（Cell Painting）中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)標記。
【相關(guān)試劑】
BCECF, AM pH熒光探針BCECF, AM
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