【參數(shù)信息】
【簡單概述】(AF405刀豆蛋白A)
AF405 Con A 是刀豆蛋白A(Concanavalin A, Con A)與熒光染料Alexa Fluor 405(AF405)的共價綴合物。
來源:從巨刀豆(Canavalia ensiformis)中提取的植物凝集素。
結(jié)構(gòu):分子量約104 kDa,由4個相同亞基組成,在pH 6.5-7.0時以四聚體形式存在,pH < 6.5解離為二聚體,pH > 7.0可形成更高聚合體。
糖結(jié)合特性:特異性識別末端α-D-甘露糖和α-D-葡萄糖殘基,結(jié)合過程依賴Ca2+和Mn2+維持活性構(gòu)象。
化學(xué)性質(zhì):一種羧酸類小分子熒光染料。
激發(fā)波長(Ex):395–401 nm(匹配405 nm激光器)
發(fā)射波長(Em):421–435 nm(藍紫色熒光)
高光穩(wěn)定性與pH穩(wěn)定性(pH 4–10內(nèi)熒光強度不變)。
功能:作為熒光報告基團,實現(xiàn)生物分子的可視化追蹤 。
綜上定義:AF405 Con A是通過化學(xué)偶聯(lián)將AF405熒光團與Con A結(jié)合形成的探針,用于特異性標(biāo)記含α-甘露糖/葡萄糖的糖基化結(jié)構(gòu)。
【AF405(熒光染料)的使用方法】
AF405 是一種藍色熒光染料(激發(fā)波長405 nm),主要用于生物標(biāo)記和成像,具體應(yīng)用如下:
(一)磁珠標(biāo)記(用于診斷或捕獲實驗):
將 NHS-AF405 與磁珠(如Dynabeads™ 1 μm或SuperMag 200 nm)按特定摩爾比例混合。
Dynabeads™:6倍摩爾過剩量(避免自淬滅)。
SuperMag磁珠:10倍摩爾過剩量(超過10倍可能導(dǎo)致熒光強度下降)。
對照實驗需使用未染色磁珠驗證標(biāo)記效果。
用于標(biāo)記特定蛋白(如SLP76、CD14),與AF647(紅色)、AF555(橙色)等多色染料搭配。
人類全血中標(biāo)記hCD14 AF405,結(jié)合其他抗體(如CD11b AF700、CD15 AF488)進行多參數(shù)分析。
濃度:5 μM(用于OATP1B3轉(zhuǎn)運蛋白功能檢測)。
實驗需設(shè)置空白對照(未轉(zhuǎn)染細胞),并計算背景熒光扣除。
避光、-20°C干燥保存,穩(wěn)定期12個月。
溶解性:水溶性,pH 4-10范圍內(nèi)熒光穩(wěn)定。
【相關(guān)試劑】
AF405 NHS 酯[相當(dāng)于 Alexa Fluor 405 NHS 酯
熒光標(biāo)記的ADP-TAMRA conjugate [5-TAMRA-eda-ADP]