【參數(shù)信息】
生產(chǎn)廠商:西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】(AF405刀豆蛋白A)
AF405 Con A 是刀豆蛋白A(Concanavalin A, Con A)與熒光染料Alexa Fluor 405(AF405)的共價(jià)綴合物。
來(lái)源:從巨刀豆(Canavalia ensiformis)中提取的植物凝集素。
結(jié)構(gòu):分子量約104 kDa,由4個(gè)相同亞基組成,在pH 6.5-7.0時(shí)以四聚體形式存在,pH < 6.5解離為二聚體,pH > 7.0可形成更高聚合體。
糖結(jié)合特性:特異性識(shí)別末端α-D-甘露糖和α-D-葡萄糖殘基,結(jié)合過(guò)程依賴Ca2+和Mn2+維持活性構(gòu)象。
化學(xué)性質(zhì):一種羧酸類小分子熒光染料。
激發(fā)波長(zhǎng)(Ex):395–401 nm(匹配405 nm激光器)
發(fā)射波長(zhǎng)(Em):421–435 nm(藍(lán)紫色熒光)
高光穩(wěn)定性與pH穩(wěn)定性(pH 4–10內(nèi)熒光強(qiáng)度不變)。
功能:作為熒光報(bào)告基團(tuán),實(shí)現(xiàn)生物分子的可視化追蹤 。
綜上定義:AF405 Con A是通過(guò)化學(xué)偶聯(lián)將AF405熒光團(tuán)與Con A結(jié)合形成的探針,用于特異性標(biāo)記含α-甘露糖/葡萄糖的糖基化結(jié)構(gòu)。
【AF405(熒光染料)的使用方法】
AF405 是一種藍(lán)色熒光染料(激發(fā)波長(zhǎng)405 nm),主要用于生物標(biāo)記和成像,具體應(yīng)用如下:
(一)磁珠標(biāo)記(用于診斷或捕獲實(shí)驗(yàn)):
將 NHS-AF405 與磁珠(如Dynabeads™ 1 μm或SuperMag 200 nm)按特定摩爾比例混合。
Dynabeads™:6倍摩爾過(guò)剩量(避免自淬滅)。
SuperMag磁珠:10倍摩爾過(guò)剩量(超過(guò)10倍可能導(dǎo)致熒光強(qiáng)度下降)。
對(duì)照實(shí)驗(yàn)需使用未染色磁珠驗(yàn)證標(biāo)記效果。
(二)細(xì)胞成像與流式細(xì)胞術(shù):
用于標(biāo)記特定蛋白(如SLP76、CD14),與AF647(紅色)、AF555(橙色)等多色染料搭配。
人類全血中標(biāo)記hCD14 AF405,結(jié)合其他抗體(如CD11b AF700、CD15 AF488)進(jìn)行多參數(shù)分析。
濃度:5 μM(用于OATP1B3轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白功能檢測(cè))。
實(shí)驗(yàn)需設(shè)置空白對(duì)照(未轉(zhuǎn)染細(xì)胞),并計(jì)算背景熒光扣除。
(四)儲(chǔ)存與處理注意事項(xiàng):
避光、-20°C干燥保存,穩(wěn)定期12個(gè)月。
溶解性:水溶性,pH 4-10范圍內(nèi)熒光穩(wěn)定。
【相關(guān)試劑】
AF405 NHS 酯[相當(dāng)于 Alexa Fluor 405 NHS 酯
熒光標(biāo)記的ADP-TAMRA conjugate [5-TAMRA-eda-ADP]
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