【參數信息】
中文名稱：XFD488 疊氮化物；AF 488疊氮化物 等同于Alexa Fluor 488
【簡單概述】（XFD488疊氮化物）
Alexa Fluor 488 azide, a green fluorescent protein, undergoes copper-catalyzed click reactions with terminal alkynes.
Beyond serving as a highly bright and light-stable fluorophore compatible with flow cytometry, microscopy, and HCS systems, it also functions as a bioorthogonal or biological hapten for applications requiring signal amplification.
綠色熒光 Alexa Fluor 488 疊氮化物可通過銅催化的點擊反應與末端炔烴發(fā)生反應。
除了作為與流式細胞分析、顯微鏡和 HCS 配合使用的極為明亮且光穩(wěn)定的熒光基團外，Alexa Fluor 488 還可作為生物正交或生物學半抗原用于需要信號放大的應用。
【常見問題】
（一）點擊標記樣品無信號或特異性信號非常低，如何提高信號？
（1）當銅離子在合適的化合價時，點擊反應才有效。除了DIBO炔烴-疊氮化物反應外，在缺乏銅離子的條件下，疊氮化物和炔烴不會相互反應。確保在制備之后、二價銅(II)濃度高時，立即使用點擊反應混合物。
（2）不要使用已經變黃的添加劑緩沖液；其必須無色狀態(tài)下才有活性。
（3）為確保TdT酶和點擊反應試劑能夠到達核內，細胞需要充分地固定和通透。為確保有足量的TdT能進入，組織樣品需要用蛋白酶K或其他蛋白水解酶消化。
（4）部分試劑能結合到銅離子上，并減少其足以催化點擊反應的有效濃度。click反應前，不要在任何緩沖液或試劑中引入任何金屬螯合劑。避免緩沖液和試劑中引入其他可能被氧化或還原的金屬離子。進行click反應前，可能需要向細胞或組織樣品加入額外的洗滌步驟。
（5）您可以用新鮮的試劑再次進行點擊反應，從而提高信號。將點擊反應的時間延長至超過30分鐘，并不會提高信號。用新鮮的點擊反應試劑再次進行30分鐘的孵育，可有效提高標記效率。
（6）自己的細胞可能沒有凋亡。準備一份DNase I處理的陽性對照，驗證TdT酶反應和點擊標記反應是否正確進行。
（二）Click-iT EdU TUNEL標記樣品成像時，觀測到較高的非特異性本底。這是什么原因造成的？如何降低本底干擾？
click反應在疊氮化物和炔烴類間選擇性。生物體系不可能有其他副反應。任何非特異性背景都是由于染料和多種細胞內組分的非共價連接。Select FX信號增強劑在click反應后減少染料的電荷為基礎的非特異性連接方面效果不明顯；我們不推薦將其與Click-iT檢測試劑一同使用。
在同樣的過程和檢測條件下做無染料或無click反應對照，以證實背景確實是由于染料而不是自發(fā)熒光。
同時應該在無TdT酶的對照樣品進行完整的click反應來證實click反應信號的特異性。
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