久久亚洲精品天码av,午夜福利屄插穴,午夜福利视频91,亚欧美爽爽爽爽爽,亚洲欧美日韩色色图片,青青操在线观看,精品天堂麻豆av,无码av东京热,婷婷成人亚洲少妇

行業(yè)產(chǎn)品

  • 行業(yè)產(chǎn)品

西安強(qiáng)化生物科技有限公司


當(dāng)前位置：西安強(qiáng)化生物科技有限公司>>熒光染料>>pGBKT7-53 Vector 酵母雙雜交對(duì)照載體

pGBKT7-53 Vector 酵母雙雜交對(duì)照載體

返回列表頁
參  考  價(jià):￥500 - ￥15000 /mg
具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
  • 產(chǎn)品型號(hào)

  • 品牌

    其他品牌

  • 廠商性質(zhì)

    生產(chǎn)商

  • 所在地

    西安市

聯(lián)系方式：李杰查看聯(lián)系方式

更新時(shí)間：2025-08-25 08:41:00瀏覽次數(shù)：326次

聯(lián)系我時(shí)，請(qǐng)告知來自 制藥網(wǎng)

經(jīng)營模式：生產(chǎn)廠家

商鋪產(chǎn)品：496條

所在地區(qū)：陜西西安市

聯(lián)系人：李杰 （經(jīng)理）

產(chǎn)品簡介

pGBKT7-53 Vector 酵母雙雜交對(duì)照載體，是酵母雙雜交系統(tǒng)的陽性對(duì)照載體，表達(dá)GAL4 DNA結(jié)合域與小鼠p53蛋白的融合蛋白，用于驗(yàn)證系統(tǒng)可靠性，含c-Myc標(biāo)簽和TRP1篩選標(biāo)記?！?/p>

詳細(xì)介紹

【??參數(shù)信息】

英文名稱：pGBKT7-53 Vector 酵母雙雜交對(duì)照載體

載體類型：酵母雙雜交系統(tǒng)載體

克隆菌株：DH5α

載體標(biāo)簽：c-Myc

篩選標(biāo)記：TRP1

啟動(dòng)子：ADH1

表達(dá)宿主：酵母細(xì)胞

5'測(cè)序引物：T7: TAATACGACTCACTATAGGG

3'測(cè)序引物：根據(jù)序列設(shè)計(jì)引物

純度：≥95%

儲(chǔ)存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強(qiáng)化生物科技

【簡單概述】

pGBKT7-53 Vector 酵母雙雜交對(duì)照載體，其核心功能是表達(dá) GAL4 DNA 結(jié)合域（DNA-BD）與小鼠p53 蛋白片段的融合蛋白，用于驗(yàn)證酵母雙雜交系統(tǒng)的可靠性。

關(guān)鍵特征

載體結(jié)構(gòu)

融合蛋白組成：

GAL4 DNA-BD（氨基酸 1-147）：負(fù)責(zé)結(jié)合靶基因啟動(dòng)子。

小鼠 p53 蛋白（氨基酸 72-390）：已知與 SV40 大 T 抗原相互作用的腫瘤抑制蛋白。

啟動(dòng)子：ADH1 啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)融合蛋白的高水平表達(dá)。

標(biāo)簽：c-Myc 表位標(biāo)簽，便于抗體檢測(cè)。

克隆位點(diǎn)：p53 cDNA 插入 EcoRI 和 BamHI 位點(diǎn)之間。

載體參數(shù)

大?。?.3 kb或 8275 bp。

抗性基因：

原核抗性：Kanamycin。

真核篩選標(biāo)記：TRP1。

復(fù)制子：

pUC ori（大腸桿菌復(fù)制起點(diǎn)）。

2μ ori（酵母復(fù)制起點(diǎn)）。

來源

p53 cDNA 源自 Lwabuchi 等（1993）描述的質(zhì)粒，經(jīng) Clontech 改造。。

【使用方法】

一、載體特性與用途

載體本質(zhì)：

編碼 GAL4 DNA結(jié)合域（BD, 1-147aa） 與 小鼠p53蛋白（72-390aa） 的融合蛋白，用于模擬已知蛋白質(zhì)相互作用（如p53與SV40大T抗原）。

作為陽性對(duì)照，驗(yàn)證酵母雙雜交系統(tǒng)的可靠性（例如：當(dāng)與pGADT7-T共轉(zhuǎn)化時(shí)，應(yīng)激活報(bào)告基因）。

二、實(shí)驗(yàn)步驟

（一）載體準(zhǔn)備

質(zhì)粒溶解：

收到凍干粉后，5000 rpm離心1分鐘，加入20 μl無菌水重懸，室溫放置1分鐘。

測(cè)定濃度（建議≥100 ng/μl），保存于-20℃。

質(zhì)粒轉(zhuǎn)化（大腸桿菌）：

將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至 DH5α 等感受態(tài)細(xì)胞，37℃培養(yǎng)，Kan（50 μg/ml）篩選。

挑取單菌落擴(kuò)增，提取高純度質(zhì)粒備用（避免直接使用凍干粉）。

（二）酵母轉(zhuǎn)化與對(duì)照實(shí)驗(yàn)

酵母感受態(tài)制備：

使用 Y2HGold 或 AH109 等標(biāo)準(zhǔn)酵母菌株，制備感受態(tài)細(xì)胞（如LiAc/PEG法）。

共轉(zhuǎn)化（陽性對(duì)照設(shè)置）：

實(shí)驗(yàn)組：pGBKT7-53（誘餌） + pGADT7-T（獵物，編碼SV40 T抗原）。

陰性對(duì)照：

pGBKT7-53 + 空pGADT7載體

pGBKT7-Lam（編碼Lamin C，無互作） + pGADT7-T。

轉(zhuǎn)化操作：

將質(zhì)粒（0.1–1 μg）與感受態(tài)酵母混合，熱激（42℃, 15分鐘），涂布于 SD/-Trp 平板（篩選pGBKT7-53轉(zhuǎn)化子）。

30℃培養(yǎng)3–5天，挑取直徑≥2 mm的單菌落。

（三）自激活與毒性檢測(cè)（關(guān)鍵質(zhì)控）

自激活測(cè)試：

將含pGBKT7-53的酵母菌落接種至：

SD/-Trp（基礎(chǔ)篩選）

SD/-Trp/-His/X-α-Gal（或 QDO/X/A 培養(yǎng)基）。

若在缺陷培養(yǎng)基上生長并顯藍(lán)色（報(bào)告基因激活），說明p53融合蛋白可能自激活，需調(diào)整3AT濃度抑制。

毒性檢測(cè)：

比較轉(zhuǎn)化子與空載體對(duì)照的生長速度，若生長延遲則提示蛋白毒性。

（四）互作篩選（以篩庫為例）

交配法（Mating）：

將含pGBKT7-53的 Y2HGold 菌株與含文庫（pGADT7-XXX）的 Y187 菌株混合，30℃培養(yǎng)24–48小時(shí)。

涂布于 DDO（SD/-Leu/-Trp） 和 QDO（SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal） 平板，篩選陽性克?。≦DO上生長且顯藍(lán)）。

陽性克隆驗(yàn)證：

菌落PCR：使用載體特異性引物（如T7啟動(dòng)子引物）擴(kuò)增插入片段。

測(cè)序鑒定：排除重復(fù)克隆，比對(duì)序列確認(rèn)互作蛋白。

點(diǎn)對(duì)點(diǎn)驗(yàn)證：將候選獵物質(zhì)粒與pGBKT7-53再次共轉(zhuǎn)化，重復(fù)互作實(shí)驗(yàn)。

【相關(guān)試劑】

FITC-Con A FITC

Cy7 tetrazine Cy7四嗪

Cy7 tetrazine Cy7四嗪

Cy5.5 tetrazine Cy5.5四嗪

Texas Red TCO 單一異構(gòu)體

Cy3B azide Cy3B 疊氮化物

CDCF 活性氧ROS熒光探針

BL21 Chemically Competent Cell

BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell

JM109(DE3) Chemically Competent Cell

HT115(DE3) Chemically Competent Cell

ArcticExpress(DE3)Chemically Competent Cell

EPI400 Electrocompetent cell 大腸桿菌電轉(zhuǎn)感受態(tài)細(xì)胞

ER-TrackerTM Blue-White DPX, for live-cell imaging

OverExpress C43(DE3)pLysS Chemically Competent Cell

以上資料由西安強(qiáng)化生物科技有限公司xxn整理！

本試劑僅適用于科研實(shí)驗(yàn)，敬請(qǐng)知悉。





您感興趣的產(chǎn)品PRODUCTS YOU ARE INTERESTED IN

制藥網(wǎng) 設(shè)計(jì)制作，未經(jīng)允許翻錄必究 .? ? ? Copyright(C)?2021 http://www.jjhengye.com,All rights reserved.

以上信息由企業(yè)自行提供，信息內(nèi)容的真實(shí)性、準(zhǔn)確性和合法性由相關(guān)企業(yè)負(fù)責(zé)，制藥網(wǎng)對(duì)此不承擔(dān)任何保證責(zé)任。 溫馨提示：為規(guī)避購買風(fēng)險(xiǎn)，建議您在購買產(chǎn)品前務(wù)必確認(rèn)供應(yīng)商資質(zhì)及產(chǎn)品質(zhì)量。

會(huì)員登錄

×

請(qǐng)輸入賬號(hào)

請(qǐng)輸入密碼

=

請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

請(qǐng) 登錄 后再收藏

提示

您的留言已提交成功！我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
刚察县| 延川县| 佳木斯市| 政和县| 莎车县| 东丰县| 太白县| 光山县| 西和县| 巴彦淖尔市| 铜陵市| 新蔡县| 临泽县| 营口市| 禄劝| 宝山区| 新蔡县| 新郑市| 库车县| 华亭县| 调兵山市| 柏乡县| 和平县| 林周县| 遵义市| 洪江市| 万源市| 永平县| 金塔县| 密云县| 武夷山市| 额尔古纳市| 文水县| 博湖县| 罗平县| 岱山县| 保定市| 民勤县| 濮阳县| 新和县| 蒙城县|