【??參數(shù)信息】
英文名稱:pBI221-EGFP Plant Expression Vector
原核抗性:氨芐青霉su(Ampicillin, Amp)
【簡單概述】
pBI221-EGFP 植物表達載體,屬于質(zhì)粒型載體(Plasmid Vector),大小為4530 bp。其核心設(shè)計包含以下元件:
啟動子:CaMV 35S啟動子,驅(qū)動外源基因或報告基因的高效表達。
報告基因:增強型綠色熒光蛋白(EGFP),用于實時監(jiān)測基因表達水平和轉(zhuǎn)化效率。
植物篩選標(biāo)記:部分版本包含β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因,用于植物轉(zhuǎn)化后的組織化學(xué)檢測。
終止子:胭脂堿合成酶終止子(NOS terminator),確保轉(zhuǎn)錄終止。
復(fù)制原點(ori):支持載體在大腸桿菌和農(nóng)桿菌中的自主復(fù)制。
【實驗步驟】
用限制性內(nèi)切酶(如SmaI和SacI)雙酶切:
瓊脂糖凝膠電泳分離,切膠回收目的片段和線性化載體。
按比例混合目的片段與載體(推薦摩爾比3:1),加入DNA連接酶:
例如:10μL體系含1μL T4 DNA連接酶、1μL緩沖液、50ng載體、150ng片段。
將連接產(chǎn)物加入DH5α感受態(tài)細胞,冰浴30分鐘→42℃熱激90秒→冰浴2分鐘。
加入LB培養(yǎng)基,37℃復(fù)蘇1小時,涂布含氨芐青霉su(50-100μg/mL)的LB平板。
37℃培養(yǎng)12-16小時,挑取單菌落擴增并提取質(zhì)粒驗證。
【相關(guān)試劑】
Alexa Fluor 647-Streptavidin
Alexa Fluor 680-Streptavidin
Fluo-4?Pentapotassium?Salt
CopyCutter Induction Solution 誘導(dǎo)液
Stigmasterol Glucoside 豆甾醇葡萄糖苷
pCAMBIA1300 Plant Expression Vector
pCAMBIA1301 Plant Expression Vector
pCAMBIA1305.1 Plant Expression Vector
pCAMBIA1305.2 Plant Expression Vector