【??參數(shù)信息】
英文名稱:TOP 10F` Chemically Competent Cell
中文名稱:大腸桿菌TOP 10F化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞
【簡單概述】
TOP 10F`菌株來源于TOP 10菌株,除了F′附加體(F′ episome)的引入。
F′附加體攜帶四環(huán)素抗性基因,使其能從攜帶f1復(fù)制子的載體中純化單鏈DNA。
F′附加體還攜帶lacIq抑制子,參與IPTG作為誘導(dǎo)劑對trc,tac和lac啟動子的誘導(dǎo)表達(dá)。
TOP 10F`菌株進(jìn)行藍(lán)白斑篩選,需要IPTG誘導(dǎo)β-半乳糖苷酶基因的表達(dá)。
recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。
大腸桿菌TOP 10F化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞,TOP 10F` 是基于大腸桿菌 TOP 10 菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞,其基因型包含 F' 附加體(F' episome)及關(guān)鍵突變(如 lacIq、recA1、endA1 等)。
抗性基因:攜帶四環(huán)素抗性(TetR)和鏈霉su抗性(StrR),適用于篩選含相應(yīng)抗生素的質(zhì)粒。
F' 附加體:引入 F' {lacIq Tn10 (TetR)} 因子,可抑制 trc、tac、lac 啟動子的表達(dá),適用于毒性蛋白的擴繁。
recA1:抑制同源重組,減少插入 DNA 的非特異性重組,提高克隆穩(wěn)定性。
endA1:缺失內(nèi)切酶 I 活性,減少質(zhì)粒降解,提升提取 DNA 的純度。
mcrA:允許克隆甲基化 DNA(如真核生物基因組),擴展應(yīng)用范圍。
轉(zhuǎn)化效率:經(jīng) pUC19 載體檢測,轉(zhuǎn)化效率可達(dá) >10? 至 10? cfu/μg DNA,高于常規(guī)感受態(tài)細(xì)胞。
用于DNA片段的克隆,適用于低豐度目的基因的擴增。
高拷貝數(shù)質(zhì)粒的快速擴增,結(jié)合endA1突變實現(xiàn)高純度質(zhì)粒DNA提取。
抗體庫構(gòu)建:用于scFv抗體文庫的篩選和富集。
基因編輯工具開發(fā):構(gòu)建CRISPR-Cas9等基因編輯載體。
病毒研究:生成寨卡病毒cDNA克隆,用于病毒研究。
【相關(guān)試劑】
Chloramphenicol, USP Grade
Carbenicillin,Disodium Salt
DH5a Chemically Competent Cell
JM109 Chemically Competent Cell
DH10B Chemically Competent Cell
JM110 Chemically Competent Cell
XL10-Gold Chemically Competent Cell
X-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷