【參數(shù)信息】
英文名稱:EvaGreen (20× in Water)
生產(chǎn)廠商:西安強(qiáng)化生物科技
【簡(jiǎn)單概述】
EvaGreen (20× in Water)是新一代雙鏈DNA(dsDNA)結(jié)合染料,可實(shí)時(shí)定量PCR(qPCR)、高分辨率熔解曲線(HRM)分析及數(shù)字PCR(ddPCR)等分子生物學(xué)應(yīng)用。
其 "20×水溶液" 指濃縮儲(chǔ)存液,使用時(shí)需稀釋至工作濃度(通常為1×)。
化學(xué)本質(zhì):綠色熒光核酸染料,激發(fā)波長(zhǎng)≈500 nm,發(fā)射波長(zhǎng)≈530 nm(結(jié)合DNA時(shí))。
結(jié)構(gòu)特點(diǎn):由兩個(gè)單體染料分子通過柔性間隔臂連接成二聚體,形成的"按需釋放"(release-on-demand)構(gòu)象。
1. "按需釋放"動(dòng)態(tài)結(jié)合模型
EvaGreen的作用機(jī)制基于其構(gòu)象轉(zhuǎn)換:
無DNA時(shí):染料分子呈閉合環(huán)狀構(gòu)象,無DNA結(jié)合活性,熒光背景極低。
有DNA時(shí):構(gòu)象轉(zhuǎn)為開放線性狀態(tài),嵌入dsDNA小溝,熒光強(qiáng)度增強(qiáng)。
動(dòng)態(tài)平衡:PCR擴(kuò)增過程中,新生成的dsDNA持續(xù)觸發(fā)染料構(gòu)象轉(zhuǎn)換,實(shí)現(xiàn)活性染料的按需供應(yīng)。
飽和濃度使用:因構(gòu)象轉(zhuǎn)換機(jī)制,EvaGreen可在高濃度下使用,提供強(qiáng)信號(hào)的同時(shí)不抑制Taq酶活性。
避免染料重分布 :高濃度下染料不易從小擴(kuò)增子遷移至大擴(kuò)增子,確保多重PCR中多個(gè)擴(kuò)增子的溶解峰清晰可辨。
【應(yīng)用領(lǐng)域】
(一)實(shí)時(shí)定量PCR(qPCR)
高靈敏度檢測(cè)低豐度靶標(biāo),適用于基因表達(dá)分析。
飽和染料濃度下可區(qū)分 單堿基突變(SNP) 、甲基化差異。
試劑盒案例:TIANGEN HRM Kit直接集成EvaGreen,簡(jiǎn)化操作并提升信噪比。
行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)染料:經(jīng)驗(yàn)證適用于液滴數(shù)字PCR的DNA結(jié)合染料。
等溫?cái)U(kuò)增:實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)擴(kuò)增進(jìn)程。
細(xì)胞活力檢測(cè):選擇性標(biāo)記死細(xì)胞。
【相關(guān)試劑】
Cell Meter FITC-Annexin V
Cell Meter 細(xì)胞自噬檢測(cè)試劑盒
Alexa Fluor 594-Streptavidin
Indo-1,AM,Cell Permeant 鈣離子熒光探針
Fluo-8 Potassium Salt, Cell lmpermeant
Indo-1 Pentapotassium Salt, Cell lmpermeant
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