【參數(shù)信息】
消光系數(shù)(EC):67,000 cm?1M?1
生產(chǎn)廠商:西安強(qiáng)化生物科技
【簡單概述】
RiboGreen RNA檢測試劑是一種超靈敏熒光核酸染料,可以用于溶液中RNA的定量檢測。
可以檢測低至1 ng/mL的RNA濃度,比傳統(tǒng)紫外分光光度法(260 nm吸光度法)靈敏度高1000倍以上。
對RNA具有高親和力,且不受游離核苷酸、蛋白質(zhì)、鹽離子等常見污染物影響,避免假陽性或假陰性結(jié)果。
適用于微量RNA樣本分析,如體外轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物定量、Northern Blot、cDNA文庫構(gòu)建、 逆轉(zhuǎn)錄PCR 及RNA測序前濃度校準(zhǔn)等。
【標(biāo)準(zhǔn)操作流程】
緩沖液配制:使用無核酸酶的1×TE緩沖液。20×TE儲存液需用DEPC處理水稀釋,并高壓滅菌去除DEPC。
現(xiàn)配現(xiàn)用,避光保存≤3小時(shí),長期儲存導(dǎo)致光降解。
RNA標(biāo)準(zhǔn)品:建議使用16S/23S rRNA,用TE稀釋至2 μg/mL。
高范圍:從2 μg/mL稀釋至終濃度1,000–10 ng/mL。
低范圍:先稀釋至100 ng/mL,再梯度稀釋至50–2.5 ng/mL。
反應(yīng)體系:等體積混合RNA標(biāo)準(zhǔn)品與工作液(如各100 μL),室溫避光孵育2-5分鐘。
預(yù)處理:若含DNA,需DNase消化,再用TE稀釋≥10倍降低鹽離子干擾。
加等體積RiboGreen工作液,避光孵育2-5分鐘。
熒光檢測:激發(fā)480 nm/發(fā)射520 nm,儀器增益需根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線高點(diǎn)調(diào)整。
數(shù)據(jù)分析:扣除試劑空白熒光值,依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算RNA濃度。
微孔板讀數(shù)器:推薦200 μL反應(yīng)體系(96孔板),檢測限200 pg RNA。
微量檢測儀:NanoDrop 3300僅需1 μL樣品,適合珍貴樣本。
【相關(guān)試劑】
N-Acetyl-L-Cysteine (NAC)
Amphotericin B, Solubilized
Decylubiquinone (mPTP inhibitor)
Equivalent toAlexa Fluor 488 NHS ester
Trypsin Inhibitor, Soybean 大豆yi酶抑制劑
ReadiLink xtra iFluor Cy3 抗體快速標(biāo)記試劑盒
熒光淬滅劑Tide Quencher 5.1WS acid [TQ5.1WS acid
熒光淬滅劑Tide Quencher 5.1WS azide [TQ5.1WS azide
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