【參數(shù)信息】
英文名稱:TOP 10 Electrocompetent cell
中文名稱:大腸桿菌TOP 10電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞
【簡單概述】
TOP 10 Electrocompetent cell電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞是一種通過特殊工藝處理大腸桿菌TOP 10 菌株制備的工程化細胞, 用于電擊轉(zhuǎn)化,不適用于熱激轉(zhuǎn)化。
其核心設(shè)計目標是實現(xiàn)外源DNA的導(dǎo)入,同時保證質(zhì)粒穩(wěn)定性和純度。
經(jīng)pUC19質(zhì)粒(2686 bp, AmpR)檢測,轉(zhuǎn)化效率 >1×101? cfu/μg DNA。
【作用機制】
作用機制:電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞的通用與TOP 10 特異性
(一) 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞的通用作用機制
電穿孔的核心是通過高壓電脈沖瞬時改變細胞膜通透性:
施加高壓電場→ 細胞膜磷脂層形成納米級孔隙,外源DNA通過孔隙進入胞質(zhì)。
DNA進入后,細胞在復(fù)蘇培養(yǎng)基中修復(fù)膜結(jié)構(gòu),恢復(fù)生長并表達外源基因。
細胞膜的流動性使孔隙在毫秒級內(nèi)閉合,避免細胞損傷。
電穿孔效率比化學(xué)法高1-2個數(shù)量級,尤其適合大片段DNA(>30 kb)或復(fù)雜結(jié)構(gòu)載體的轉(zhuǎn)化。
TOP 10 的基因型設(shè)計使其在電轉(zhuǎn)過程中具有優(yōu)勢:
recA1突變:阻斷同源重組途徑,降低插入片段重排概率。
endA1突變:消除核酸內(nèi)切酶I的降解作用,提高質(zhì)粒提取純度。
Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC):解除對甲基化DNA的限制,可轉(zhuǎn)化真核來源的甲基化DNA。
mcrA缺失:允許高效轉(zhuǎn)化PCR產(chǎn)物的未甲基化DNA。
生長速度介于DH5α與Mach1-T1之間,10小時內(nèi)可見克隆。
阿拉伯糖代謝缺陷型(araΔ139):適用于基于araBAD啟動子的誘導(dǎo)表達系統(tǒng),避免誘導(dǎo)劑降解。
【相關(guān)試劑】
Lucifer Yellow Cadaverine
Alexa Fluor 555-Streptavidin
Alexa Fluor 594-Streptavidin
Ethidium Monoazide Bromide
TB1 Chemically Competent Cell
BL21-AI Chemically Competent Cell
BL21-CodonPlus (DE3)-RIPL Competent Cell