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GT115 Electrocompetent Cell

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更新時間：2026-01-12 13:35:14瀏覽次數(shù)：195次

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  熒光染料

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西安強化生物科技有限公司

經(jīng)營模式：生產(chǎn)廠家

商鋪產(chǎn)品：496條

所在地區(qū)：陜西西安市

聯(lián)系人：李杰（經(jīng)理）

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產(chǎn)品簡介

GT115 Electrocompetent Cell是一種通過電穿孔技術實現(xiàn)外源DNA高效轉(zhuǎn)化的大腸桿菌工程菌株。

詳細介紹

【參數(shù)信息】

英文名稱：GT115 Electrocompetent Cell

中文名稱：GT115 電轉(zhuǎn)感受態(tài)細胞

運輸條件：干冰運輸。

穩(wěn)定性關鍵因素：

反復凍融會降低轉(zhuǎn)化效率；

高于-80℃會導致細胞損傷。

純度：≥95%

儲存條件：-20℃避光干燥

生產(chǎn)廠商：西安強化生物科技

【簡單概述】

GT115 Electrocompetent Cell是一種通過電穿孔技術實現(xiàn)外源DNA高效轉(zhuǎn)化的大腸桿菌工程菌株。

用于克隆含發(fā)夾結(jié)構或重復序列等復雜二級結(jié)構的DNA片段。

其核心特性包括：

基因型特殊性

基因型：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80 lacZΔM15ΔlacX74 recA1 rpsL (StrR) endA1 Δdcm uidA(ΔMluI)::pir-116 ΔsbcC-sbcD 。

關鍵突變：

ΔsbcC-sbcD：消除SbcCD蛋白復合體活性，防止其識別并切割DNA發(fā)夾結(jié)構，提升發(fā)夾結(jié)構質(zhì)粒的穩(wěn)定性與拷貝數(shù) 。

uidA(ΔMluI)::pir-116：表達π蛋白（Pi protein），支持含R6Kγ復制原點的質(zhì)粒的復制。

recA1和endA1突變：抑制重組酶和核酸酶活性，減少外源DNA降解，提高質(zhì)粒純度。

rpsL (StrR)：賦予鏈霉su抗性，便于轉(zhuǎn)化篩選。

電轉(zhuǎn)特性

通過高壓電脈沖在細胞膜上形成瞬時孔隙，使DNA直接進入胞內(nèi)，轉(zhuǎn)化效率高達 >1×101? cfu/μg DNA，遠超化學法。

適用于文庫構建、大質(zhì)粒轉(zhuǎn)化及低濃度DNA樣品。

【使用方法】

（1）將0.1 cm電擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈吸水紙上5min，待其瀝干水分，正置5min，使乙醇充分揮發(fā)干凈，立即插入冰中，壓實冰面，電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5min使其充分降溫。

（2）取-80℃保存的感受態(tài)細胞插入冰中5min，待其融化。

（3）往50μl感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA，用手撥管底使其混勻，避免產(chǎn)生氣泡，立即插入冰中。

（4）用槍輕輕吹打混勻感受態(tài)細胞-DNA之后快速轉(zhuǎn)移到電擊杯中，避免產(chǎn)生氣泡，輕輕晃動使液面保持水平，蓋上杯蓋，插入冰中。

（5）啟動電轉(zhuǎn)儀，設置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV，將電擊杯從冰內(nèi)取出，用吸水紙擦干表面水漬，放入電轉(zhuǎn)槽中，電擊完成后取出電擊杯放室溫。

打開杯蓋，15s內(nèi)加入900μl無抗生素的無菌S.O.C.培養(yǎng)基，用1ml槍吹吸電擊杯底部數(shù)次混勻后，轉(zhuǎn)移到50ml離心管，向離心管內(nèi)補加預熱的S.O.C.培養(yǎng)基定容至10ml。

于37℃，225rpm振蕩復蘇培養(yǎng)1h。

（6）5,000rpm離心1min，重懸后取100~200μl加到含相應抗生素的S.O.C.平板上，用無菌玻棒輕輕的將細胞均勻涂開。

室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，37℃過夜培養(yǎng)13~17h。

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本試劑僅適用于科研實驗，敬請知悉。

關鍵詞：離心管

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GT115 Electrocompetent Cell