5(6)-Carboxy-2'',7''-dichlorofluorescein Diacetate是一種多功能熒光探針，可精準(zhǔn)檢測細(xì)胞內(nèi)酯酶活性，追蹤細(xì)胞增殖與遷移，還能監(jiān)測氧化應(yīng)激和酸性微環(huán)境，為細(xì)胞生物學(xué)研究提供關(guān)鍵工具。

詳細(xì)介紹

試劑名稱：5-(6)-CDCFDA

儲(chǔ)存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋運(yùn)輸。

產(chǎn)地：西安強(qiáng)化生物

化學(xué)名稱：5(6)-Carboxy-2'',7''-dichlorofluorescein Diacetate

CAS：127770-45-0

分子式：C25H14Cl2O9

分子量：529.28 g/mol

一、描述與基本特性：

5(6)-Carboxy-2'',7''-dichlorofluorescein Diacetate，該化合物是一種常用的熒光探針，應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)和生物化學(xué)研究中，可檢測細(xì)胞內(nèi)酯酶活性。

光學(xué)性質(zhì)與熒光特性

激發(fā)波長：504nm

發(fā)射波長：529nm

熒光機(jī)制:

該化合物為細(xì)胞膜通透性探針，進(jìn)入細(xì)胞后被細(xì)胞內(nèi)酯酶水解，脫去乙酸基團(tuán)，生成熒光產(chǎn)物 5(6)-Carboxy-2',7'-dichlorofluorescein (CDF) 。

pKa ≈ 4.8，在酸性環(huán)境中熒光增強(qiáng)，可用作pH傳感器。

淬滅問題：所有熒光染料均存在光淬滅，需避光操作。

【應(yīng)用領(lǐng)域】

（一）細(xì)胞示蹤與增殖研究

細(xì)胞增殖定量：

熒光標(biāo)記母細(xì)胞，子代細(xì)胞繼承半數(shù)熒光，分裂次數(shù)增加則熒光遞減（流式細(xì)胞術(shù)追蹤）。

適用細(xì)胞：淋巴細(xì)胞、干細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等。

體內(nèi)細(xì)胞遷移：

移植標(biāo)記細(xì)胞（如干細(xì)胞）后，活體成像追蹤歸巢、分化與遷移。

（二）氧化應(yīng)激與微環(huán)境監(jiān)測

ROS生成動(dòng)態(tài)：熒光強(qiáng)度變化反映活細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激水平。

酸性區(qū)室定位：溶酶體等酸性細(xì)胞器的pH傳感。

二、合成方法

核心路線：由2',7'-二氯熒光素衍生

前體制備：鄰苯二甲酸酐與一氯間ben二酚在無水ZnCl?催化下縮合，經(jīng)鹽酸酸化得2',7'-二氯熒光素。

乙?；磻?yīng)：

2',7'-二氯熒光素與乙酸酐（Ac?O）在吡啶中反應(yīng)，生成 二乙酸酯中間體 。

羧基化：

中間體在堿性條件下（如KOH/乙醇）水解，再經(jīng)酸化得目標(biāo)產(chǎn)物。

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