試劑名稱:LysoSensor Yellow/Blue DND-160 溶酶體黃/藍色熒光探針
LysoSensor Yellow/Blue DND-160是一種比率型熒光探針,用于活細胞內酸性細胞器的pH值測量。
DND-160通過以下機制特異性富集于溶酶體等酸性區(qū)室:
探針的弱堿性基團在低pH環(huán)境中結合質子,形成帶正電的離子態(tài),使其無法穿透脂質膜而滯留于酸性細胞器內。
質子化緩解熒光猝滅:質子化后,分子內電荷轉移受抑制,熒光強度增強(可達100倍),實現信號放大。
雙發(fā)射光譜特性:通過測量藍光(440 nm)與黃光(540 nm)的發(fā)射強度比率,可直接反映pH值,避免因探針濃度、光漂白或細胞厚度差異導致的誤差。
動態(tài)響應范圍:pH 3.5–6.0,覆蓋溶酶體生理pH(4.5–5.5)。
生成與融合:通過時間分辨成像,可追蹤溶酶體形成、成熟及與自噬體融合過程。
膜通透性:探針滯留能力可反映溶酶體膜完整性,如凋亡過程中膜通透性增加導致探針泄漏。
二、染色步驟
將1 mM原液用培養(yǎng)基稀釋至 工作濃度(通?!? μM),現配現用。
激發(fā)波長:360–365 nm(等吸點附近)
Lucifer Yellow Cadaverine
Alexa Fluor 555-Streptavidin
Alexa Fluor 405-Streptavidin
Alexa Fluor 680-Streptavidin
Lucifer Yellow CH dipotassium salt
YOYO 1 Green Fluorescent Dye
Lucifer Yellow CH dipotassium salt
BAPTA,Tetrapotassium Salt鈣螯合劑