試劑名稱:Coelenterazine H(腔腸素 H)
分子量:407.46

Coelenterazine H(腔腸素 H)是天然腔腸素的去羥基衍生物,外觀為黃色固體,可溶于甲醇、乙醇、丙二醇,但不溶于 DMSO。
光學(xué)特性:紫外吸收峰(λmax)為 433 nm,熒光發(fā)射峰為 466 nm(藍光)。
作為海腎熒光素酶(Rluc)、高斯熒光素酶(Gluc)等的作用底物,在氧氣存在下被氧化,產(chǎn)生高能中間體并發(fā)射 450–480 nm 藍光,發(fā)光強度為天然腔腸素的 10–20 倍 。
與水母發(fā)光蛋白結(jié)合形成復(fù)合物。當鈣離子結(jié)合(需 3 個鈣離子)時,腔腸素 H 被氧化生成 Coelenteramide,釋放 CO2和 466 nm 藍光,實現(xiàn)對鈣離子濃度的超靈敏檢測。
腔腸素 H 是海洋生物發(fā)光系統(tǒng)的核心底物,其作用機制主要依賴兩類生物分子:熒光素酶和發(fā)光蛋白。
在氧氣存在下,熒光素酶催化腔腸素 H 氧化,生成高能量中間體 Coelenteramide,同時釋放光子(藍光,峰值波長 466 nm)。
發(fā)光強度比天然腔腸素 高10倍以上,靈敏度提升。
無需ATP,適用于活體成像和體內(nèi)報告基因檢測。
2. 作為水母發(fā)光蛋白輔因子(鈣離子檢測)
腔腸素 H 與水母發(fā)光蛋白(Aequorin)結(jié)合形成復(fù)合物。當 Ca2+ 結(jié)合該復(fù)合物時,觸發(fā)腔腸素 H 氧化發(fā)光,發(fā)光強度與 Ca2+濃度呈 三次冪正相關(guān)。
對 Ca2+ 的敏感性高于天然腔腸素,可檢測 0.1 μM ~ >100 μM 的微小濃度變化。
無自體熒光干擾,背景信號低,適用于活細胞鈣振蕩監(jiān)測。
在 活性氧(ROS) 存在下,腔腸素 H 可發(fā)生自發(fā)氧化并發(fā)光,用于定量細胞/組織內(nèi) ROS 水平。
4. 生物發(fā)光共振能量轉(zhuǎn)移(BRET)
腔腸素 H 被熒光素酶氧化產(chǎn)生的藍光(~466 nm)可激發(fā)鄰近的 熒光受體蛋白(如GFP、EYFP),實現(xiàn)能量轉(zhuǎn)移(發(fā)射綠光,~530 nm)。
研究蛋白質(zhì)相互作用(如GPCR信號通路)。
消除細胞數(shù)量/類型差異對信號的干擾,適用于藥物高通量篩選。
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