小鼠白介素Elisa試劑盒操作步驟

天正信達(dá)結(jié)合你此前關(guān)注的封板膜、熒光檢測ELISA相關(guān)實(shí)驗(yàn)背景，小鼠白介素ELISA試劑盒的標(biāo)準(zhǔn)操作步驟如下，全程適配常規(guī)96孔板實(shí)驗(yàn)流程，可保障白介素定量結(jié)果的準(zhǔn)確性：

一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備

設(shè)備與耗材?：準(zhǔn)備450±10nm濾光片的酶標(biāo)儀、單/多通道精密移液器及槍頭、用于樣本稀釋的Eppendorf管。

試劑預(yù)處理?：若濃縮液中析出結(jié)晶，置于40℃水浴（溫度不超過50℃）中溫和加熱至結(jié)晶溶解，使用前冷卻至室溫。

適用范圍?：該試劑盒為雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)，可對小鼠血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等生物流體中的白介素進(jìn)行體外定量檢測，僅用于科研用途，不可用于治療或診斷場景。

二、標(biāo)準(zhǔn)品配制

將標(biāo)準(zhǔn)品管以10000×g轉(zhuǎn)速離心1分鐘，使管壁上的粉末沉降至管底。

向標(biāo)準(zhǔn)品管中加入1ml樣本稀釋緩沖液，標(biāo)記為儲備液，室溫放置10分鐘，多次顛倒混勻，也可使用低速渦旋振蕩器振蕩3-5秒。

以1000×g轉(zhuǎn)速離心1分鐘，收集管底液體并去除氣泡。

標(biāo)記7個Eppendorf管，分別標(biāo)注1/2、1/4、1/8、1/16、1/32、1/64和空白，向每管中加入300μl樣本稀釋緩沖液，完成梯度稀釋，得到系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品。

三、正式實(shí)驗(yàn)操作

提前將所有試劑從冰箱取出，平衡至室溫，避免低溫導(dǎo)致的反應(yīng)效率偏差。

設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔和空白孔，每孔分別加入對應(yīng)濃度的標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣本100μl，空白孔加入等量樣本稀釋緩沖液。

貼上封板膜，37℃溫育1小時，選擇適配的封板膜保障密封性，避免液體蒸發(fā)影響結(jié)果。

棄去孔內(nèi)液體，無需洗滌，每孔加入檢測試劑A工作液100μl，貼上封板膜，37℃溫育1小時。

棄去孔內(nèi)液體，每孔加入300μl洗滌緩沖液，浸泡1-2分鐘后棄去液體，重復(fù)洗滌3-5次，最后一次拍干孔內(nèi)殘留液體。

每孔加入檢測試劑B工作液100μl，貼上封板膜，37℃溫育30分鐘。

重復(fù)洗板5次，拍干孔內(nèi)液體，每孔加入90μl TMB底物溶液，貼上封板膜，37℃避光顯色10-20分鐘，待標(biāo)準(zhǔn)品孔出現(xiàn)明顯藍(lán)色梯度即可終止反應(yīng)。

每孔加入50μl終止液，輕輕晃動混勻，此時藍(lán)色會立即轉(zhuǎn)為黃色。

用酶標(biāo)儀在450nm波長下依次測定各孔的OD值，讀數(shù)需在加入終止液后15分鐘內(nèi)完成。

四、結(jié)果計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為橫坐標(biāo)，對應(yīng)的OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)待測樣本的OD值，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出對應(yīng)樣本中小鼠白介素的實(shí)際濃度。

注：以上科研產(chǎn)品資料供參考，具體可咨詢技術(shù)老師！

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