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膠體金免疫金銀組織化學(xué)技術(shù)

發(fā)布時間:2010-7-9

Kausche等(1939)煙草花葉病毒吸附到金顆粒上,在電鏡下觀察金離子呈高電子密度。然而膠體金技術(shù)作為標(biāo)記物應(yīng)用于IHC是由Fauld和Taylor(1971)在《免疫化學(xué)雜志》上報道了應(yīng)用膠體金標(biāo)記抗沙門菌抗血清,檢測細(xì)菌表面抗原,并在電鏡下看到在細(xì)菌抗原—抗體結(jié)合部位上的膠體金顆粒。他們的這一研究成功地為免疫金技術(shù)的發(fā)展奠定了基礎(chǔ)。膠體金能穩(wěn)定又迅速地吸附蛋白質(zhì),而蛋白質(zhì)的生物活性沒有明顯的改變,并從電鏡水平過渡發(fā)展到光鏡水平的應(yīng)用。膠體金可以作為探針進(jìn)行細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)多糖、糖蛋白、蛋白質(zhì)、多肽、抗原、激素及癌基因蛋白等生物大分子的定位。其優(yōu)點可列舉數(shù)十條,例如:

①膠體金溶液可以重復(fù)制備,其顆粒大小可以控制,可較容易進(jìn)行免疫電鏡的雙重或多重標(biāo)記;
②金標(biāo)探針有很高的電子密度,有特殊的分辨率,定位準(zhǔn)確;
③金標(biāo)探針能發(fā)射二次電子和反射電子,是掃描電鏡目前的標(biāo)記物;
④金標(biāo)探針與組織細(xì)胞內(nèi)的抗原結(jié)合后,可用銀增強(qiáng),大大提高了IHC的敏感性,是目前zui為敏感的IHC方法之一;
⑤免疫金銀染色方法無致癌性,使用較安全。

膠體金技術(shù)是以膠體金作為一種標(biāo)記物。膠體金是指金的水溶膠,它具有一般溶膠的特性。溶膠是指一種物質(zhì)以或大或小的微小粒子分散在另一種物質(zhì)中所形成的體系。被分散的物質(zhì)叫分散相,容納分散相的另一種物質(zhì)稱為分散介質(zhì)。

根據(jù)分散相質(zhì)點的大小不同,可將分散系分為三大類。
(1)離子分散體系 是指分散相以小分子(1nm以下)或離子狀態(tài)存在,具有高度的穩(wěn)定性,無論放置多久,分散相顆粒都不會因重力而下沉,不會從溶液中分離出來。
(2)膠體分散體系 是指分散相顆粒直徑在1~100nm之間的分散體系。其外觀透明,不渾濁,在普通顯微鏡下看不到它的分散粒子,不易受重力影響與分散介質(zhì)分離沉降,但其中的溶膠粒子有聚結(jié)變大的傾向,即具有聚結(jié)不穩(wěn)定性。
(3)粗分散體系 分散相顆粒是由許多分子組成,因粒子較大,用肉眼或顯微鏡即可見,其特點是不穩(wěn)定,常因重力而自動沉降,外觀渾濁不透明。

 

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