技術(shù)文章
實(shí)驗(yàn)二十七 大腸桿菌生長曲線測(cè)定
發(fā)布時(shí)間:2010-4-2一、基本原理
一定量的微生物,接種在適合的新鮮液體培養(yǎng)基中,在適宜的溫度下培養(yǎng),以菌數(shù)的對(duì)數(shù)作縱坐標(biāo),生長時(shí)間作橫坐標(biāo),做出的曲線叫生長曲線。一般可分為延遲期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個(gè)時(shí)期。不同的微生物有不同的生長曲線,同一種微生物在不同的培養(yǎng)條件下,其生長曲線也不一樣。因此,測(cè)定微生物的生長曲線對(duì)于了解和掌握微生物的生長規(guī)律是很有幫助的。
測(cè)定微生物生長曲線的方法很多,有血球計(jì)數(shù)法、平板菌落計(jì)數(shù)法、稱重法、比濁法等。本實(shí)驗(yàn)采用比濁法測(cè)定,由于細(xì)菌懸液的濃度與混濁度成正比,因此,可利用光電比色計(jì)測(cè)定菌懸液的光密度來推知菌液的濃度,并將所測(cè)得的光密度值(OD值)與其對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)時(shí)間作圖,即可繪出該菌在一定條件下的生長曲線?,F(xiàn)已有直接用試管就可以測(cè)定OD值的光電比色計(jì)(圖Ⅶ-10),只要接種一支試管,定期用它測(cè)定,便可做出該菌的生長曲線。
二、器材
培養(yǎng)18—20小時(shí)的大腸桿菌培養(yǎng)液,盛有5ml肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的大試管12支;
72型或72.1型分光光度計(jì),自控水浴振蕩器或搖床,無菌吸管等。
三、操作步驟
1.編號(hào)
取11支盛有肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基的大試管,用記號(hào)筆標(biāo)明培養(yǎng)時(shí)間,即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20小時(shí)。
2.接種
用1ml無菌吸管,每次準(zhǔn)確地吸取0.2ml大腸桿菌培養(yǎng)液,分別接種到已編號(hào)的11支肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基大試管中,接種后振蕩,使菌體混勻。
3.培養(yǎng)
將接種后的11支試管置于自控水浴振蕩器或搖床上,37℃振蕩培養(yǎng)。分別在0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16、20小時(shí)將編號(hào)為對(duì)應(yīng)時(shí)間的試管取出,立即放冰箱中貯存,zui后一同比濁測(cè)定光密度值。
4.比濁測(cè)定
以未接種的肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作空白對(duì)照,選用540—560nm波長進(jìn)行光電比濁測(cè)定。從zui稀濃度的菌懸液開始依次進(jìn)行測(cè)定,對(duì)濃度大的菌懸液用未接種的肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基適當(dāng)稀釋后測(cè)定,使其光密度值在0.1—0.65以內(nèi),記錄OD值時(shí),注意乘上所稀釋的倍數(shù)。
四、實(shí)驗(yàn)報(bào)告
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