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細(xì)菌的單染色法
發(fā)布時(shí)間：2010-1-27一、基本原理
所謂單染色法是利用單一染料對(duì)細(xì)菌進(jìn)行染色的一種方法。此法操作簡(jiǎn)便，適用于菌體一般形態(tài)的觀(guān)察。
在中性、堿性或弱酸性溶液中，細(xì)菌細(xì)胞通常帶負(fù)電荷，所以常用堿性染料進(jìn)行染色。堿性染料并不是堿，和其他染料一樣是一種鹽，電離時(shí)染料離子帶正電，易與帶負(fù)電荷的細(xì)菌結(jié)合而使細(xì)菌著色。例如，美藍(lán)（亞甲藍(lán)）實(shí)際上是氯化亞甲藍(lán)鹽（methylenebluechloride，縮寫(xiě)為MBC），它可被電離成正、負(fù)離子：
MBC→methylene blue++chloride-
帶正電荷的染料離子可使細(xì)菌細(xì)胞染成藍(lán)色。常用的堿性染料除美藍(lán)外，還有結(jié)晶紫（crystal violet）、堿性復(fù)紅（basicfu-chsin）、番紅（又稱(chēng)沙黃，safranine）等。
細(xì)菌體積小，較透明，如未經(jīng)染色常不易識(shí)別，而經(jīng)著色后，與背景形成鮮明的對(duì)比，使易于在顯微鏡下進(jìn)行觀(guān)察。
二、器材
顯微鏡，酒精燈，載玻片，接種環(huán)，雙層瓶，擦鏡紙，生理鹽水；
呂氏堿性美藍(lán)染色液，石炭酸復(fù)紅染色液；
金黃色葡萄球菌，枯草芽孢桿菌。
三、操作步驟
1．涂片 取兩塊干凈的載玻片，各滴一小滴生理鹽水于載玻片*，用無(wú)菌操作（圖Ⅳ-1，具體操作參照實(shí)驗(yàn)一），分別挑取金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌于二載玻片的水滴中（每一種菌制一片），調(diào)勻并涂成薄膜。注意滴生理鹽水時(shí)不宜過(guò)多，涂片必須均勻。
2．干燥 于室溫中自然干燥。
3．固定 涂片面向上，于火焰上通過(guò)2—3次，使細(xì)胞質(zhì)凝固，以固定細(xì)菌的形態(tài)，并使其不易脫落。但不能在火焰上烤，否則細(xì)菌形態(tài)將毀壞。
4．染色 放標(biāo)本于水平位置，滴加染色液于涂片薄膜上，染色時(shí)間長(zhǎng)短隨不同染色液而定。呂氏堿性美藍(lán)染色液約染2—3分鐘，石炭酸復(fù)紅染色液約染1—2分鐘。
5．水洗 染色時(shí)間到后，用自來(lái)水沖洗，直至沖下之水無(wú)色時(shí)為止。注意沖洗水流不宜過(guò)急，過(guò)大，水由玻片上端流下，避免直接沖在涂片處。沖洗后，將標(biāo)本晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干，待*干燥后才可置油鏡下觀(guān)察。
6．鏡檢
按實(shí)驗(yàn)二操作程序進(jìn)行顯微鏡觀(guān)察。
四、實(shí)驗(yàn)報(bào)告