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1  介紹

濃縮果汁中有時含有導(dǎo)致*的芽孢菌，耐酸耐熱菌，也叫TAB，它們的特點是：

1）  能耐熱的孢子；

2）  能耐果汁中的酸；

3）  能在含有很少量的氧中生長；

這個程序描述了檢驗濃縮蘋果清汁（比如蘋果）的TAB的檢驗方法。

2   設(shè)備和試劑

2.1  設(shè)備

2.1.1  三角瓶：1000ml。

2.1.2  滅菌的99ml的去離子水的稀釋空白。

2.1.3  磁力攪拌棒。

2.1.4  帶有攪拌器的加熱盤。

2.1.5  塑料注射器：10ml。

2.1.6  注射用的濾膜裝置(0.45um)。

2.1.7  滅菌培養(yǎng)皿：90mm。

2.1.8  恒溫水浴鍋：74-76°C。

2.1.9  恒溫培養(yǎng)箱：43±1℃。

2.1.10 廣口滅菌吸管：25ml。

2.1.11 一次性的帶有螺旋蓋子的試管。

2.1.12 可以無菌過濾0.45um的過濾裝置。

2.1.13 異丙基酒精。

2.2   試劑

2.2.1 酵母粉(VWR DF0127-15)

2.2.2 蛋白胨(VWR DF0118-15)

2.2.3 瓊脂粉(VWR DF0145-17)

2.2.4 葡萄糖(VWR EM-DX0145-11)

2.2.5 吐溫80(VWR JTX 257-7)

2.2.6 蘋果酸(VWR JTP494-7)

3   操作步驟

3.1 配制K氏培養(yǎng)基，在一個1升的燒瓶中，加入：

3.1.1 去離子水：500-mL

3.1.2 酵母粉： 1.25-g

3.1.3 蛋白胨： 2.50-g

3.1.4 瓊脂粉： 7.50-g

3.1.5 葡萄糖： 0.50-g

3.1.6 吐溫80：0.50-mL

3.1.7 磁力攪拌裝置

或者直接購買K氏培養(yǎng)基，按照廠家的說明配制。

3.2  加熱使藥品充分溶解。

3.3  輕輕的蓋上燒瓶的塞子，將培養(yǎng)基在15磅下高壓滅菌25分鐘。

3.4  在一個小燒杯中加入1.0克的蘋果酸和10 ml去離子水，攪拌使其溶解。

3.5  將蘋果酸的溶液抽入10ml的一次性塑料注射器中。

3.6  在塑料注射器的末端進行無菌的濾膜過濾。

3.7  K氏培養(yǎng)基滅菌結(jié)束后，將蘋果酸的溶液用注射器無菌的濾膜過濾到K氏培養(yǎng)基中，充分搖勻。

3.8    當培養(yǎng)基冷卻到大約50°C時，將酸化后的培養(yǎng)基倒入到一次性培養(yǎng)皿中。

3.9    等待培養(yǎng)基凝固后，在≤5°C的條件下冷藏，可以保存60天。

3.2  采樣

3.2.1 樣品不必采取無菌的方式采集，但是要防止和其他樣品的交叉污染。

3.2.2 采樣的容器必須是滅菌的。

3.2.3 取樣時，從大桶中取樣出來所用的器具應(yīng)先用水清洗，然后在200ppm的有效氯中浸泡后，才可以浸入大桶中取樣。

3.3 熱沖擊

3.3.1 調(diào)節(jié)水浴鍋到74-76°C。

3.3.2 用一個廣口吸管吸取1ml樣品于帶有蓋子的試管中，準備測試。

3.3.3 加入10ml滅菌水。

3.3.4 緊緊的蓋上試管的蓋子。

3.3.5 將此樣品放到水浴鍋中，用計時器計時13分鐘。

4  數(shù)據(jù)分析

4.1  將熱沖擊后的樣品加入到99ml的滅菌水空白中，充分混勻。

4.2  用一次性的0.45um的濾膜過濾稀釋液。

4.3  移開過濾器的上部。                                                       

4.4  將鑷子的在酒精中浸后，點燃滅菌。

4.5  用這個滅菌的鑷子將濾膜夾到K氏培養(yǎng)基上。

4.5  輕敲濾膜使它緊貼到K氏培養(yǎng)基上。

4.6  蓋上培養(yǎng)皿的蓋子，把培養(yǎng)皿包起來，以減少培養(yǎng)基的干燥。

4.7  在培養(yǎng)箱底部的架子上放一盤去離子水，以保證培養(yǎng)箱內(nèi)潮濕防止培養(yǎng)基干裂。

4.8  放置培養(yǎng)皿時，將培養(yǎng)皿的蓋子朝下。

4.9  在43°C 下培養(yǎng) 5天，記錄濾膜上的菌落數(shù)，它們是1ml的濃縮果汁樣品的TAB數(shù)目。

參考資料：Coca Cola公司耐熱耐酸菌的檢測。