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一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模赫莆瘴⑸镒儺惖脑?，學(xué)習(xí)用梯度平板法分離抗藥性突變株 

二.實(shí)驗(yàn)原理：基因突變可分為自發(fā)突變和誘發(fā)突變。許多物理、化學(xué)、生物因素對(duì)微生物都有誘變作用。 

基因中堿基順序的改變可導(dǎo)致微生物細(xì)胞的遺傳變異。這種變異有時(shí)能使細(xì)胞在有害的環(huán)境中存活下來，抗藥性突變就是一個(gè)例子。微生物的抗藥性突變是DNA分子的某一特定位置的結(jié)構(gòu)改變所致，與藥物的存在無關(guān)，某種藥物的存在只是作為分離某種抗藥性菌株的一種手段，而不是引發(fā)突變的誘導(dǎo)物。因而在含有一定抑制生長(zhǎng)藥物濃度的平板上涂布大量的細(xì)胞群體，極個(gè)別抗性突變的細(xì)胞會(huì)在平板上生成菌落。將這些菌落挑取純化，進(jìn)一步進(jìn)行抗性試驗(yàn)，就可以得到所需要的抗藥性菌株。抗藥性突變常用作遺傳標(biāo)記，因而掌握分離抗藥性突變株的方法是非常重要的。 

 為了便于選擇適當(dāng)?shù)乃幬餄舛?，分離抗藥性突變株常用梯度平板法。本實(shí)驗(yàn)用梯度平板法分離大腸桿菌抗鏈霉素突變株。 

三. 實(shí)驗(yàn)用品：參考實(shí)驗(yàn)教材上的實(shí)驗(yàn)用品。 

四.實(shí)驗(yàn)操作： 

（1）取一個(gè)已經(jīng)滅菌的空平皿，把培養(yǎng)皿斜放(一邊墊起)，在無菌條件下倒入不含藥物的底層培養(yǎng)基（10mL LB培養(yǎng)基）； 

（2）待平板中的培養(yǎng)基凝固后將平皿放平，再倒入含有鏈霉素的上層培養(yǎng)基（10mL LB培養(yǎng)基，含有鏈霉素100μg/mL）； 

備注：這樣便得到鏈霉素濃度從一邊到另一邊逐漸降低的梯度平板。 

（3）取一支大腸桿菌液體培養(yǎng)物，用移液管移取0.2mL菌液到梯度平板上，進(jìn)行涂布。 

（5）將平板倒置于37℃培養(yǎng)2天；觀察經(jīng)一次培養(yǎng)的梯度平板上大腸桿菌的生長(zhǎng)情況。 

（6）選擇平板上1～2個(gè)生長(zhǎng)在梯度平板中部的單個(gè)菌落，用無菌接種環(huán)接觸單個(gè)菌落朝高藥物濃度的方向劃線。 

（7）將平板倒置于37℃培養(yǎng)2天；觀察經(jīng)二次培養(yǎng)的梯度平板上大腸桿菌的生長(zhǎng)情況。  

五.注意事項(xiàng)： 

玻璃涂布棒在火焰上灼燒后要待其冷卻后再進(jìn)行涂布，以免燙死細(xì)胞；可以蘸上乙醇后在火焰上灼燒，以縮短冷卻的時(shí)間。