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 1．原理  Hoechst 33258和Hoechst 33342均為非嵌人性熒光染料。它們在活細(xì)胞 中  DNA聚AT序列富集區(qū)域的小溝處與DNA結(jié)合?；罴?xì)胞或固定細(xì)胞均可從低濃度溶液中  攝取該染料。從而使細(xì)胞核著色。故又把此類染料稱為DNA探針。Hoechst 33342和Hoechst 33258均可溶于水并在水溶液中保持穩(wěn)定。Hoechsr-DNA的激發(fā)和發(fā)射波長分別550nm和460nm。在熒光顯微鏡紫外光激發(fā)時，Hoechst-DNA發(fā)出亮藍(lán)色熒光。

 

    2．溶液的配制

    (1)Hoechst 33258儲存液

    Hoechst 33258                lmg

    0．01mol／LPBS(pH 7．4)     5ml

    (2)Hoechst 33258工作液(終濃度為0．5ug／ml)

    Hoechst 33258濃縮液         125ul

    0．01mol／LPBS(pH 7．4)    50ml

 

    3．操作程序

    (1)細(xì)胞懸液或培養(yǎng)單層細(xì)胞等標(biāo)本，用醋酸―乙醇或Carnoy固定液固定；

    (2)0．01mol／LPBS漂洗5分鐘；

    (3)Hoechst 33258工作液染色，室溫15分鐘；

    (4)0．01mol／LPBS漂洗3次，每次5分鐘；

    (5)用甘油與PBS比例為1：9的混合液或水溶性封片劑封片，熒光顯微鏡觀察。

 

    結(jié)果：該染料為DNA 的特異性熒光探針，細(xì)胞核呈亮藍(lán)色熒光