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   1．原理  DAPI 為4’，6二脒基-2-苯吲哚(4’，6―diamidino-2―phenylindole)能與雙鏈DNA小槽，特別是AT堿基結(jié)合，也可插入少于3個(gè)連續(xù)AT堿基對(duì)的DNA序列中。當(dāng)它與雙鏈DNA結(jié)合時(shí)，熒光強(qiáng)度增強(qiáng)20倍，而與單鏈DNA結(jié)合則無(wú)熒光增強(qiáng)現(xiàn)象，因此是一種簡(jiǎn)易、快速和敏感地檢測(cè)DNA的方法。DAPI的熒光強(qiáng)度雖較Hoechst低，但熒光穩(wěn)定性優(yōu)于Hoechst；其特異性較溴化乙啶(ethidlium bromide，EB)和碘化丙啶(propidium iodide，P1)高。

 

    2．溶液配制

    (1)0．01mol／L PBS(pH7．0)：取0．1mol／L NaH₂ PO₄ ?H₂ O 34ml、0．1mol／LNa₂ HPO₄ 66ml、NaCl 0．9g，溶于900m1雙蒸水；

    (2)DAPI儲(chǔ)存液：將0．5mgDAPI溶于5．0ml PBS中，分裝，低溫長(zhǎng)期保存；

    (3)DAPI工作液：用PBS稀釋DAPI儲(chǔ)存液，終濃度為0．1ug／ml。

 

    3．染色程序

    (1)培養(yǎng)的單層細(xì)胞 (未固定)或新鮮組織的冰凍切片等，PBS漂洗5分鐘；

    (2)DAPI工作液室溫染色5～20分鐘(可根據(jù)實(shí)驗(yàn)材料的染色結(jié)果而定)；

    (3)PBS漂洗；

    (4)水溶性封片劑封片，游離細(xì)胞也可直接用含DAPI的PBS封片；

    (5)熒光顯微鏡觀察。

 

    結(jié)果：正常的細(xì)胞核呈強(qiáng)熒光，細(xì)胞質(zhì)無(wú)熒光；固定的組織細(xì)胞同樣處理，亦可得到相似的染色結(jié)果。在有支原體污染的細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞表面可見(jiàn)孤立的點(diǎn)狀熒光，在感染痘苗病毒的細(xì)胞質(zhì)中存在*的“星狀”熒光簇(star-like fluorescent clusters)，腺病毒感染早期胞質(zhì)中也可出現(xiàn)熒光。