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ABC法雖然是一種很好的方法，但是在實際應(yīng)用過程中．確實也存在許多問題，如親和  素中含有約?％的糖類，它可與組織中含糖基的物質(zhì)起反應(yīng)，造成背景著色。親和素的等電  點約為10左右?？蓭л^多的負(fù)電荷，纖維組織可帶較多的正電荷，這兩種電荷可互相吸引，造成背景著色。親和素中有4個結(jié)合點，其中一半與連接抗體結(jié)合，另一半與復(fù)合物結(jié)合，如此可降低其敏感性。

 

    為解決和克服存在的問題，20世紀(jì)90年代初提出了用鏈霉親和素(streptavidin)替代ABC法中的親和素―生物素復(fù)合物，形成鏈霉菌抗生物素蛋白 ―過氧化物酶法(streptavidin-peroxidasemethod。SP法)。鏈霉親和素是從鏈霉菌中分離出的一種蛋白，含有四個亞基，每個亞基均具有與生物素親和力*的結(jié)合點。

 

    鏈霉親和素的四個亞基可以全部和二抗上的生物素結(jié)合，故又稱鏈霉菌抗生物素蛋白，它對組織穿透性強(qiáng)，反應(yīng)速度快。鏈霉親和素的等電點為5.5～6.7，接近中性，所帶的負(fù)電荷少，不容易與組織中的正電荷發(fā)生相互吸引，因而可降低背景著色。此外，鏈霉親和素不含糖基，不存在與組織中含糖基類物質(zhì)起反應(yīng)的現(xiàn)象。該放大系統(tǒng)不含生物素，可以免除由內(nèi)源性生物素所造成的背景著色，因此背景清晰，無非特異性染色，陽性反應(yīng)物突出，明顯易辨。從某種意義上講，SP法比ABC法的敏感性至少高一倍以上。由于它的敏感性強(qiáng)，效果好，因此更受研究者歡迎。

免疫組織化學(xué)SP法原理示意圖