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滅活內(nèi)源性酶及封閉內(nèi)源性生物素
發(fā)布時間：2013-12-26在生物體組織內(nèi)均含有一定量的內(nèi)源性酶和內(nèi)源性生物素，如富含血細胞的組織標(biāo)本有大量具有活性的過氧化物酶，肝、脾、腎、腦及胚胎組織中富含生物素。如采用過氧化物酶檢測系統(tǒng)或堿性磷酸酶和NBT/BCIP顯色系統(tǒng)進行免疫組織化學(xué)染色時．酶的作用是催化底物，使顯色劑顯色，而組織中的內(nèi)源性酶同樣也能催化底物，使其顯色，這就影響免疫組織化學(xué)染色的特異性。在使用親和素試劑的免疫 組織化學(xué)染色中，內(nèi)源性生物素易結(jié)合親和素，形成親和素一生物素復(fù)合物，導(dǎo)致假陽性。所以在染色之前應(yīng)設(shè)法將組織內(nèi)的內(nèi)源性酶滅活或?qū)?nèi)源性生物素封閉，以保證染色的特異性。
(1)滅活內(nèi)源性過氧化物 酶：將組織在3％甲醇―H2 O2 (3ml純甲醇中加入30％H2 02 0．3ml，現(xiàn)用現(xiàn)配)中室溫浸泡10分鐘，繼而用PBS沖洗3次，每次5分鐘。
(2)滅活堿性磷酸酶：zui常用的方法是將左旋咪唑(以每毫升加24mg)加入底物液中并保持pH為7．6～8．2，可除去大部分內(nèi)源性堿性磷酸酶，對于仍能干擾染色的酸性磷酸酶可用0．05mol/L酒石酸抑制。
(3)封閉內(nèi)源性生物素：將組織切片用0．0l％親和素溶液室溫處理10～20分鐘，使其結(jié)合位點飽和，以消除內(nèi)源性生物素的活性。也可購買生物素阻斷劑試劑盒，其中A液為親和素．B液為生物素。使用時加A液l滴，室溫10分鐘，PBS沖洗3次，每次2分鐘；加B液1滴。室溫10分鐘．PBS沖洗3次，每次2分鐘。
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