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　　原理
　　
　　葉綠素a、b在紅光區(qū)的zui大吸收峰分別為663nm和645nm，可用以下聯(lián)立方程求葉綠素溶液中的葉綠素a、b的含量。
　　
　　D663=82.04Ca9.27Cb……………………（1）
　　
　　D645=16.75Ca45.6Cb……………………（2）
　　
　　式中D663、D664分別為波長(zhǎng)663nm和645nm處測(cè)定葉綠素溶液的光密度；Ca、Cb分別為葉綠素a、b的濃度（g/L）；82.04、9.27分別為葉綠素a、b在波長(zhǎng)663nm時(shí)的比吸收系數(shù)，16.75、46.6分別為葉綠素a、b在波長(zhǎng)645nm時(shí)的比吸收系數(shù)。
　　
　　解聯(lián)立方程（1）、（2）則得：
　　
　　Ca=0.0127D663-0.00269D645……………（3）
　　
　　Cb=0.0229D645-0.00468D663……………（4）
　　
　　如把葉綠素含量單位由g/L改為mg/L，（3）、（4）式則可改寫為：
　　
　　Ca（mg/L）=12.7D663-2.69D645…………（5）
　　
　　Cb（mg/L）=22.9D645-4.68D663…………（6）
　　
　　葉綠素總量C（mg/L）=CaCb=20.2D6458.02D663……（7）
　　
　　葉綠素總量也可根據(jù)下式求導(dǎo)
　　
　　D652=34.5×C……………（8）
　　
　　652nm為葉綠素a與b在紅光區(qū)吸收光譜曲線的交叉點(diǎn)（等吸收點(diǎn)），34.5為葉綠素a、b在波長(zhǎng)652nm處的吸收系數(shù)。
　　
　　DC=D652/34.5（g/L）Cd
　　
　　DC=D652×1000/34.5（mg/L）………（9）
　　
　　因此，利用（5）、（6）式可分別計(jì)算葉綠素a與b含量，利用（7）式或（9）式可計(jì)算葉綠素總量。
　　
　　葉綠體色素的提取液中除含有葉綠素a與b外，還含有葉黃素和胡蘿卜素，因?yàn)槿~黃素和胡蘿卜素的吸收光譜均在藍(lán)光區(qū)，故不會(huì)干擾葉綠素含量在紅光區(qū)的分光光度法測(cè)定。
　　
　　器材與試劑
　　
　　722分光光度計(jì)，葉綠體色素提取所需器材。
　　
　　方法與步驟
　　
　　1.提取葉綠素。
　　
　　2.測(cè)定光密度。
　　
　　在1cm比色杯中，注入葉綠素提取液（濃度大時(shí)需稀釋）。另以葉綠素提取介質(zhì)作為參比溶液注入同樣的比色杯中。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，選用相應(yīng)的波長(zhǎng)（測(cè)總量選用652nm，測(cè)葉綠素a、b含量及總量選用663nm和645nm），在分光光度計(jì)上測(cè)定光密度。
　　
　　3.計(jì)算結(jié)果：把測(cè)定的光密度代入上述公式可求出比色杯中的葉綠素含量。如要計(jì)算樣品中葉綠素含量時(shí)，需要考慮稀釋因子。
　　
　　樣品中葉綠素含量（mgChl/g鮮重或mgChl/ml葉綠體）
　　
　　D=比色杯中葉綠素含量×稀釋倍數(shù)/樣品量（g鮮重或ml葉綠體）
　　
　　注意事項(xiàng)
　　
　　用分光光度法測(cè)定物質(zhì)含量時(shí)，分光光度計(jì)的波長(zhǎng)調(diào)節(jié)要準(zhǔn)確，參比杯與測(cè)定杯的透光率要一致。