技術文章
IL-18 的檢測
發(fā)布時間:2012-5-511:18又稱干擾素誘導因子,主要由活化的巨噬細胞和庫否細胞及成骨基質細胞和腎上腺皮質細胞產生。其主要生物學活性是誘導T細胞產生GM-CSF,促進T細胞增殖和增強NK細胞活性以及誘導THl細胞產生IFN-7。其誘導IFN-y和GM—CSF的能力及誘導CTLL-2細胞生長的能力強于IL-2,并與IL-2有協(xié)同效應。IL-18亦可誘導ID2的產生和促進Fas的表達以及抑制IL-10的產生。
(1)C3H/H2J小鼠脾細胞增殖法:用ConA(5ug/mL)和系列稀釋的IL-18樣品共同刺激誘導IFN-y產生。再用ELISA法或病毒抑制試驗檢測細胞培養(yǎng)上清液中的IFN-7含量或活性,以此推測IL-18的活性。
(2)人PBMC增殖法:取3×106/mLPBMC培養(yǎng)在含10%FCS的RPMI-1640培養(yǎng)液中,加入不同濃度的誘導劑(抗CD3抗體0.1ug/mL或10U/mL IL-2或ConA0.5ug/ml)和系列稀釋的人IL-18待檢樣品。置37℃5%C02溫箱中培養(yǎng)24h,用ELISA法或病毒抑制試驗檢測細胞培養(yǎng)上清液中的IFN-7含量或活性,以此推測IL-18的活性。1個單位的IL-18活性為IL-18與0.5ug/mLConA共刺激時,能誘導0.25mLPBMC(7.5X105細胞)產生1601U/mLIFN-y所需的IL-18量。
(3)51Cr釋放試驗:此法可檢測IL-18誘導NK細胞殺傷K562細胞的能力,將人PBMC與系列稀釋的IL-18樣品共孵育24h,然后測定PBMC中的NK細胞活性。
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