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技術(shù)文章

運(yùn)用流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)細(xì)胞應(yīng)注意的問題

發(fā)布時(shí)間:2012-2-25

制作組織勻漿或細(xì)胞懸液,用熒光染料染色,則可以用流式細(xì)胞儀計(jì)數(shù)不同DNA含量或倍數(shù)的細(xì)胞數(shù)。例如,在睪丸組織中,精子細(xì)胞為單倍體細(xì)胞,精原細(xì)胞、Sertoli細(xì)胞、Leydig細(xì)胞和其他非生精細(xì)胞為雙倍體細(xì)胞,初級精母細(xì)胞以及處于分裂期的精原細(xì)胞和非生精細(xì)胞為四倍體細(xì)胞。因此,運(yùn)用流式細(xì)胞儀測定睪丸組織各級生精細(xì)胞DNA倍體的變化,可以間接判斷不同生精細(xì)胞數(shù)目相對比例變化的趨勢。但是,利用這些結(jié)果得出結(jié)論時(shí)一定要謹(jǐn)慎。例如,單倍體細(xì)胞數(shù)所占百分比下降可能說明精子細(xì)胞數(shù)量減少,但以下三種情況也可能引起百分比下降:

 
    一是單倍體細(xì)胞數(shù)不變,其他倍體細(xì)胞數(shù)增加;
 
    二是單倍體細(xì)胞數(shù)增加,其他倍體細(xì)胞數(shù)也增加而且增加得相對較多;
 
    三是單倍體細(xì)胞數(shù)減少,其他倍體細(xì)胞數(shù)也減少,只是減少得相對較少。
 
    與此類似,該百分比不變可能說明精子發(fā)生未受到影響,但以下兩種情況也可能出現(xiàn)此種結(jié)果:單倍體細(xì)胞和其他倍體細(xì)胞成比例地增加;單倍體細(xì)胞和其他倍體細(xì)胞成比例地減少。因此,姑且不論細(xì)胞的準(zhǔn)確辨認(rèn)以及組織勻漿過程中細(xì)胞粉碎等問題,流式細(xì)胞儀估計(jì)細(xì)胞數(shù)至少存在這樣一個(gè)缺陷:一般只能反映細(xì)胞的相對數(shù)目比,而不能確定測定的細(xì)胞在某感興趣區(qū)域內(nèi)的總數(shù)目是否真的有所增加、減少或不變。

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