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PCR無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物的原因及對(duì)策
發(fā)布時(shí)間:2011-11-21現(xiàn)象:正對(duì)照有條帶,而樣品則無(wú)
原因:
1.模板:含有抑制物,含量低
2.Buffer對(duì)樣品不合適
3.引物設(shè)計(jì)不當(dāng)或者發(fā)生降解
4.反應(yīng)條件:退火溫度太高,延伸時(shí)間太短
對(duì)策:
1.純化模板或者使用試劑盒提取模板DNA或加大模板的用量
2.更換Buffer或調(diào)整濃度
3.重新設(shè)計(jì)引物(避免鏈間二聚體和鏈內(nèi)二級(jí)結(jié)構(gòu))或者換一管新引物
4.降低退火溫度、延長(zhǎng)延伸時(shí)間
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