技術(shù)文章
蠟樣芽孢桿菌食物中毒的檢查方法
發(fā)布時(shí)間:2011-4-26
1.直接鏡檢和活菌計(jì)數(shù)
(1)直接鏡檢采取患者嘔吐物或剩余殘食等為檢樣。將其用無(wú)菌生理鹽水浸漬、稀釋后制涂片,干燥,革蘭染色、鏡檢。若有革蘭陽(yáng)性大桿菌[(4~5)um×1um左右l菌兩端較平整,芽孢不大于菌體寬度,中生或稍偏端,運(yùn)動(dòng),即為可疑菌。
?。?)活菌計(jì)數(shù)將殘余食物以無(wú)菌生理鹽水稀釋成1:10,1:100,1:1000,…,分別用lml的滅菌吸管各吸取稀釋液0.1ml作傾注培養(yǎng),或接種于10%卵黃瓊脂平板上,用滅菌的L形棒涂勻于平板表面,置37℃溫箱培養(yǎng)12h后,取出計(jì)數(shù)。3-6h后該菌在卵黃瓊脂平板上產(chǎn)生乳白色渾濁環(huán),可和不產(chǎn)生乳白色渾濁的枯草桿菌等雜菌區(qū)別。
2。分離培養(yǎng)
將嘔吐物直接劃線或先把剩余殘食等置滅菌乳缽中加適量無(wú)菌生理鹽水研磨后,劃線接種于普通平板或血平板,或10%卵黃瓊脂平板上,置37~C培養(yǎng)18-24h后觀察。如普通瓊脂上生長(zhǎng)呈乳白色,不透明,邊緣不整齊常為擴(kuò)散狀,直徑4~6mm的菌落,迎光觀察似白蠟狀,可疑為蠟樣桿菌。血平板上,菌落為灰色不透明似毛玻璃狀,其周?chē)什菥G色溶血。
3。生化反應(yīng)
該菌分解葡萄糖、麥芽糖、糊精、蔗糖;不分解乳糖、鼠李糖、木糖、伯膠糖、甘露醇、肌醇、山梨醇及側(cè)金盞花醇。吲哚陽(yáng)性,甲基紅陰性,V.P陽(yáng)性,檸檬酸鹽利用、卵磷脂酶、KCN均為陽(yáng)性。在24L內(nèi)液化明膠。H:S、脲酶陰性。酪蛋白酶、觸酶陽(yáng)性,溶血還原硝酸鹽,溶血還原美藍(lán)、石蕊牛乳迅速蛋白胨化。
4.卵磷脂酶試驗(yàn)
用鉑耳取疑似蠟樣芽孢桿菌的肉湯培養(yǎng)物點(diǎn)種于10%的卵黃瓊脂平板上,該菌在其上有強(qiáng)烈的磷脂酶作用,生長(zhǎng)迅速,于37~C培養(yǎng)3h后雖未見(jiàn)菌落但可看到因卵磷脂酶分解卵磷脂而呈乳白色渾濁環(huán),稱(chēng)乳光反應(yīng)。6h后此環(huán)可擴(kuò)散至5-6mm。
(1)直接鏡檢采取患者嘔吐物或剩余殘食等為檢樣。將其用無(wú)菌生理鹽水浸漬、稀釋后制涂片,干燥,革蘭染色、鏡檢。若有革蘭陽(yáng)性大桿菌[(4~5)um×1um左右l菌兩端較平整,芽孢不大于菌體寬度,中生或稍偏端,運(yùn)動(dòng),即為可疑菌。
?。?)活菌計(jì)數(shù)將殘余食物以無(wú)菌生理鹽水稀釋成1:10,1:100,1:1000,…,分別用lml的滅菌吸管各吸取稀釋液0.1ml作傾注培養(yǎng),或接種于10%卵黃瓊脂平板上,用滅菌的L形棒涂勻于平板表面,置37℃溫箱培養(yǎng)12h后,取出計(jì)數(shù)。3-6h后該菌在卵黃瓊脂平板上產(chǎn)生乳白色渾濁環(huán),可和不產(chǎn)生乳白色渾濁的枯草桿菌等雜菌區(qū)別。
2。分離培養(yǎng)
將嘔吐物直接劃線或先把剩余殘食等置滅菌乳缽中加適量無(wú)菌生理鹽水研磨后,劃線接種于普通平板或血平板,或10%卵黃瓊脂平板上,置37~C培養(yǎng)18-24h后觀察。如普通瓊脂上生長(zhǎng)呈乳白色,不透明,邊緣不整齊常為擴(kuò)散狀,直徑4~6mm的菌落,迎光觀察似白蠟狀,可疑為蠟樣桿菌。血平板上,菌落為灰色不透明似毛玻璃狀,其周?chē)什菥G色溶血。
3。生化反應(yīng)
該菌分解葡萄糖、麥芽糖、糊精、蔗糖;不分解乳糖、鼠李糖、木糖、伯膠糖、甘露醇、肌醇、山梨醇及側(cè)金盞花醇。吲哚陽(yáng)性,甲基紅陰性,V.P陽(yáng)性,檸檬酸鹽利用、卵磷脂酶、KCN均為陽(yáng)性。在24L內(nèi)液化明膠。H:S、脲酶陰性。酪蛋白酶、觸酶陽(yáng)性,溶血還原硝酸鹽,溶血還原美藍(lán)、石蕊牛乳迅速蛋白胨化。
4.卵磷脂酶試驗(yàn)
用鉑耳取疑似蠟樣芽孢桿菌的肉湯培養(yǎng)物點(diǎn)種于10%的卵黃瓊脂平板上,該菌在其上有強(qiáng)烈的磷脂酶作用,生長(zhǎng)迅速,于37~C培養(yǎng)3h后雖未見(jiàn)菌落但可看到因卵磷脂酶分解卵磷脂而呈乳白色渾濁環(huán),稱(chēng)乳光反應(yīng)。6h后此環(huán)可擴(kuò)散至5-6mm。
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