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致病性試驗鑒定新城疫
發(fā)布時間：2011-3-12當采用血凝和血凝抑制將分離到的病毒鑒定為NDV時，并不能確定其暴發(fā)新城疫。根據(jù)OIE的規(guī)定，還必須對分離到的病毒進行毒力測定。評價新城疫病毒的毒力指標有3個，即zui小致死量致死雞胚平均死亡時間（MDT）、1日齡雛雞腦內(nèi)接種致病指數(shù)（1CPl）和6周齡雛雞靜脈接種致病指數(shù)（1VPl）。
（1）ICPI測定 首先取血凝滴度為2‘以上的新鮮感染雞胚尿囊液，在生物安全柜中用滅菌生理鹽水稀釋10倍；將稀釋好的病毒液用微量一次性注射器腦內(nèi)接種在隔離器中飼養(yǎng)的1日齡SPF雛雞，每份樣品接種10只，每只接種0．05mi，并設生理鹽水和標準毒株陽性對照。將接種雞在隔離器中隔離飼養(yǎng)，每24h觀察一次，連續(xù)觀察8天，每天觀察即應給雞打分，正常雞記作0，病雞記作1，死亡雞記作2（死亡雞在死后每天觀察都記作2）。ICPI是指每只雞8天內(nèi)所有觀察計分總數(shù)的平均數(shù)。按照下列公式計算其ICPI。
8天累計發(fā)病數(shù)X1+8天累計死亡數(shù)X2
CPI=8天累計發(fā)病數(shù)×1+8天累計死亡數(shù)×2÷8天累計麗熏雞的總數(shù)
ICPl值越大，NDV致病性越強。zui強毒力病毒的ICPI接近2．o，而弱毒株毒力的ICPI值為0。
（2）IVPI測定 在生物安全柜中將血凝滴度為2‘以上的新鮮感染尿囊液，用滅菌生理鹽水稀釋l0倍；翅靜脈接種10只在隔離器中飼養(yǎng)的6周齡SPF小雞，每只0．1ml。并設生理鹽水和標準毒株陽性對照，隔離飼養(yǎng)。每24h對接種的雞觀察一次，連續(xù)觀察l0天，每天觀察應給雞打分，正常雞記作0，病雞記作1，癱瘓雞或有其他神經(jīng)癥狀的記作2，死亡雞記作3（死亡雞在死后的每天觀察都記作3。IVPI是10天內(nèi)每次觀察每只雞的記錄總數(shù)的平均數(shù)。按照下面列出的公式計算其1VPl。
IVPI= 10天累計發(fā)病數(shù)×1+10天累計癱瘓數(shù)× 2+10天累計死亡數(shù)× 3÷10天累計觀察雞只總數(shù)
IVPI值越大，NDV致病性越強。zui強毒力的病毒的IVPI值可達3．0，弱毒株的IVPI值為0。
（3）MDT測定 在生物安全柜中將新鮮感染尿囊液，用含有青鏈霉素的滅菌生理鹽水稀釋成10-6- 10-9個不同稀釋度，每個稀釋度分別接種5只9-l0日齡SPF雞胚，每只接種o．1ml稀釋好的病毒液；置于孵化器37~C孵育，每天早晚觀察2次，間隔12h，棄去24h之內(nèi)死亡的雞胚尿囊液。連續(xù)觀察7天，每次觀察都應記錄雞胚死亡的時間。取能夠致死所有雞胚的病毒zui大稀釋倍數(shù)作為該病毒的zui小致死量（MLD）。MDT是指zui小致死量引起雞胚死亡的平均時間。按照下表公式計算其MDT。MDT低于60h為強毒型NDV
MDT值在60—90h為中等毒力型NDV；MDT大于90h為低毒力NDV。
MDT=（Xh死亡胚數(shù)×Xh+YL死亡胚數(shù)×Yh+…）÷死亡胚總