技術文章
均相熒光免疫測定
發(fā)布時間:2011-1-12
均相熒光免疫測定(homogeneousfluorescenceimmunoassay)是根據(jù)1972年Rubenstein等建立的均相酶免疫測定法(HEl)發(fā)展形成的一種新型免疫熒光分析技術。所謂“均相”是指在反應結束后無須對游離和結合的標記物進行分離,直接測定即可。均相熒光免疫測定是利用熒光的一些特殊的理化特性(如熒光的激發(fā)、吸收、淬滅等),在標記抗原與特異性抗體結合后發(fā)生改變,據(jù)此設計建立的各種試驗方法。
?。ㄒ唬晒獯銣缑庖邷y定
熒光淬滅免疫測定(fluorescencequenchingimmunoassay)反應系統(tǒng)內(nèi)除待測藥物外,同時加入某種待測小分子抗原和一定量用熒光物質(zhì)標記的該抗原,二者與有*的特異性抗體競爭結合。當抗體與此種標記抗原結合時,發(fā)生淬滅作用使熒光物質(zhì)的熒光消失;因而無須分離直接測定反應系統(tǒng)的偏振熒光強度。如樣品中未標記抗原含量高,則競爭結合的抗體多,使游離的標記抗原增多,經(jīng)紫外光激發(fā)后熒光強度高,二者呈正相關,據(jù)此可以定量測定樣品抗原含量。
?。ǘ晒獗Wo免疫測定法
1982年,Hanssan等在試驗中引入了抗熒光素抗體,以淬滅反應系統(tǒng)中的游離熒光素。而對于已和特異性抗體結合的標記抗原的熒光則無影響,即特異性抗體與標記抗原結合后,可以保護其熒光免受抗熒光素抗體的淬滅作用,從而達到均相反應的要求。當樣品中未標記的待測抗原含量高時,競爭與特異性抗體結合,使游離的熒光素標記抗原增多,由于受到抗熒光素抗體的淬滅作用,受激發(fā)后熒光產(chǎn)生量反而減少,二者呈負相關,據(jù)此可以定量測定樣品中待測抗原的含量。熒光保護免疫測定法(fluorescenceprotectionimmunoassay)可用于測定甲狀腺素、人血清清蛋白、IgG等。
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熒光淬滅免疫測定(fluorescencequenchingimmunoassay)反應系統(tǒng)內(nèi)除待測藥物外,同時加入某種待測小分子抗原和一定量用熒光物質(zhì)標記的該抗原,二者與有*的特異性抗體競爭結合。當抗體與此種標記抗原結合時,發(fā)生淬滅作用使熒光物質(zhì)的熒光消失;因而無須分離直接測定反應系統(tǒng)的偏振熒光強度。如樣品中未標記抗原含量高,則競爭結合的抗體多,使游離的標記抗原增多,經(jīng)紫外光激發(fā)后熒光強度高,二者呈正相關,據(jù)此可以定量測定樣品抗原含量。
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1982年,Hanssan等在試驗中引入了抗熒光素抗體,以淬滅反應系統(tǒng)中的游離熒光素。而對于已和特異性抗體結合的標記抗原的熒光則無影響,即特異性抗體與標記抗原結合后,可以保護其熒光免受抗熒光素抗體的淬滅作用,從而達到均相反應的要求。當樣品中未標記的待測抗原含量高時,競爭與特異性抗體結合,使游離的熒光素標記抗原增多,由于受到抗熒光素抗體的淬滅作用,受激發(fā)后熒光產(chǎn)生量反而減少,二者呈負相關,據(jù)此可以定量測定樣品中待測抗原的含量。熒光保護免疫測定法(fluorescenceprotectionimmunoassay)可用于測定甲狀腺素、人血清清蛋白、IgG等。
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