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技術(shù)文章

單克隆抗體的鑒定

發(fā)布時(shí)間:2010-12-25

對(duì)制備的McAb進(jìn)行系統(tǒng)的鑒定是十分必要的,應(yīng)做下述5個(gè)方面的鑒定。

1.抗體特異性的鑒定 除用免疫原(抗原)進(jìn)行抗體的檢測(cè)外,還應(yīng)該用與其抗原成分相關(guān)的其他抗原進(jìn)行交叉試驗(yàn),方法可用ELISA法、IFA法。例如:①制備抗黑色素瘤細(xì)胞的McAb,除用黑色素瘤細(xì)胞反應(yīng)外,還應(yīng)該用其他臟器的腫瘤細(xì)胞和正常細(xì)胞進(jìn)行交叉反應(yīng),以便挑選腫瘤特異性抗原或腫瘤相關(guān)抗原的單克隆抗體。②制備抗重組細(xì)胞因子的單克隆抗體應(yīng)首先考慮是否與表達(dá)菌株的蛋白有交叉反應(yīng),其次是與其他細(xì)胞因子間有無(wú)交叉反應(yīng)。

2.McAb的Ig類與亞類的鑒定 一般在用酶標(biāo)或熒光素標(biāo)記的第2抗體進(jìn)行篩選時(shí)已經(jīng)基本上確定了抗體的Ig類型。如果用的是酶標(biāo)記或熒光素標(biāo)記的兔抗鼠IgG或IgM,則檢測(cè)出的抗體一般是IgG類或IgM類。至于亞類則需要用標(biāo)準(zhǔn)抗亞類血清系統(tǒng)作雙擴(kuò)或夾心ELISA來(lái)確定。在作雙擴(kuò)試驗(yàn)時(shí),如加入適量的PEG(3%)更有利于沉淀線的形成。

3.McAb中和活性的鑒定 用動(dòng)物或細(xì)胞的保護(hù)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定McAb的生物學(xué)活性。例如,如果確定抗病毒McAb的中和活性,則可用抗體和病毒同時(shí)接種于易感動(dòng)物或敏感細(xì)胞,來(lái)觀察動(dòng)物或細(xì)胞是否得到抗體的保護(hù)。

4.McAb識(shí)別抗原表位的鑒定 用競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)測(cè)相加指數(shù)的方法測(cè)定McAb所識(shí)別抗原位點(diǎn),來(lái)確定McAb的識(shí)別表位是否相同。

5.McAb親和力的鑒定 用ELISA或RIA競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合實(shí)驗(yàn)來(lái)確定McAb與相應(yīng)抗原結(jié)合的親和力。

 

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