技術(shù)文章
聚合酶鏈反應(yīng)PCR反應(yīng)體系
發(fā)布時(shí)間:2010-12-18PCR是20世紀(jì)80年代由美國西特斯公司的一批科學(xué)家、技術(shù)人員和商人發(fā)明的,主要?jiǎng)P利·穆利斯(Kary Mullis)因此獲得了1993年的諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)。其他科學(xué)家和技術(shù)人員,包括厄立克(Henry Erlieh)、安海姆(Norman Arnheim)、才木(Ran—daliSaiki)、霍恩(GlenHorn)、利文生(Corey Levenson),沙夫(StevenScharf)等都在造就PCR的理論和實(shí)踐過程中起關(guān)鍵作用。
聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)PCR技術(shù)有助于鑒定某一特定的片段,它能在短時(shí)間內(nèi)地復(fù)制成百萬的該DNA片段,使一度非常稀有的實(shí)驗(yàn)所需要的遺傳物質(zhì)變得豐富。遺傳物質(zhì)不但總量變多,而且不再受限于活的生物體。該技術(shù)與克隆技術(shù)相比較而言,克隆雖然也能使稀有的遺傳物質(zhì)變豐富,但必須采用活的生物體作為復(fù)制遺傳物質(zhì)的載體。PCR在擺脫此種活體依賴性方面前進(jìn)了一大步,從而促進(jìn)了基因操作效率的提高以及更重要的基因操作靈活性等方面的進(jìn)步。PCR技術(shù)極大地?cái)U(kuò)展了遺傳物質(zhì)鑒定與操作的可能性,對(duì)分子生物學(xué)的現(xiàn)實(shí)與前景產(chǎn)生了不可估量的影響。PCR的新用途為科學(xué)研究開辟了新方向,這些新方向又反過來為PCR提供了新用途?,F(xiàn)在,PCR已經(jīng)成為所有分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的一個(gè)常規(guī)組成部分。
使用Taq耐熱DNA聚合酶的常規(guī)PCR擴(kuò)增體系如下。
10×擴(kuò)增緩沖液l0ul
10—50mmol/LTris—HCl(pH7.5~9.0)
6~50mmol/LKCl或(NH4)2S04
1.5~5.0mmol/LMgCl2或MgS04
四種dNTP混合物各200umol/L
每種寡核苷酸引物各0.1-1.0umol/L
耐熱DNA聚合酶2.0~2.5U
核酸模板102~105拷貝
加蒸餾水到100ul
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