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EB病毒（epstein-barr virus，EBV）屬皰疹病毒科，有學(xué)者提出此病毒為第1個人類腫瘤病毒的候選者。EBV直徑為90～180nm，為20面體核衣殼，有162個衣殼體，含有1個蛋白核心和DNA分子，病毒基因組為線性雙鏈DNA。原發(fā)性感染發(fā)生在幼兒時，多為隱性感染，此后終身帶病毒；若原發(fā)感染發(fā)生在青春期后，則相當(dāng)一部分為顯性感染。EBV感染患者后可出現(xiàn)傳染性單核細(xì)胞增多癥、X—連鎖淋巴增殖綜合征，以及與EBV相關(guān)的惡性疾病如鼻咽癌、霍奇金淋巴瘤等。
[測定方法] ELISA法
[方法學(xué)原理] 將純化的EB病毒抗原預(yù)包被于微孔板上，加入稀釋過的患者血清于相應(yīng)微孔板中，若存在EBVAb-IgM則可與微孔板上包被抗原相結(jié)合。洗去未結(jié)合部分后，再加入酶聯(lián)結(jié)合物，與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合，在顯色劑作用下發(fā)生顯色反應(yīng)，顏色強(qiáng)度與樣本中EBVAb-IgM含量呈正相關(guān)。
[標(biāo)本準(zhǔn)備] 靜脈抽血2ml，不抗凝。
[試劑]
微孔板
樣品稀釋液
HRP-抗人IgM酶結(jié)合物
陰性對照
陽性對照
洗滌劑
TMB顯色液
終止液
[儀器設(shè)備] 酶標(biāo)儀或全自動酶聯(lián)免疫檢測儀。
[測定步驟]
1．將待檢血清編號，用樣品稀釋液作1；100稀釋。
2．根據(jù)用量取出相應(yīng)孔數(shù)的微孔板條，其余部分密封后4℃環(huán)境中保存。
3．加人已稀釋的待檢血清、陰性對照，陽性對照各lOOgI至反應(yīng)孔內(nèi)，陰性對照、陽性對照設(shè)復(fù)孔，設(shè)空白對照1孔（空白孔不加任何試劑），振蕩混勻，37℃環(huán)境中溫育1h。
4．棄去孔中液體，用洗滌液洗滌5次，拍干。
5．每孔加入酶標(biāo)記物lOOtA，混勻，37℃環(huán)境中水浴1h。
6．棄去孔中液體，用洗滌液洗滌5次，拍干。
7．向每孔加入底物A液和底物B液各2滴，置室溫環(huán)境中10min，每孔再加終止液50gl終止反應(yīng)。
8．以空白對照（只加蒸餾水200g1）校零，在波長450nm處讀取各孔的OD值，凡樣品孔OD大于或等于陰性對照孔2倍，該樣品即為陽性。
[正常參考值] EBVAb-IgM陰性
[注意事項]
1．使用前試劑盒應(yīng)預(yù)先在室溫環(huán)境中平衡30min。
2．試劑盒在2—8℃避光保存，啟用后應(yīng)盡快用完。
3．不同批次的試劑組分不能混用。
4．實驗后試劑、血清標(biāo)本均應(yīng)視為有傳染性物質(zhì)。
5．用滴瓶滴加時，滴瓶應(yīng)垂直，用力和速度應(yīng)均勻；加樣后，充分混勻。