技術(shù)文章
EB病毒抗體IgA(EBVAb-IgA)檢測
發(fā)布時間:2010-11-10[測定方法] ELISA法
[方法學原理] 將純化的EB病毒抗原預包被于微孔板上,若待測樣本中存在EBVAb-IgA,則可與微孔板上預包被的EB—VAg結(jié)合,再加入酶聯(lián)試劑與抗原抗體復合物結(jié)合,在顯色劑作用下發(fā)生顯色反應,顏色的深淺與樣本中抗體含量呈正相關(guān)。
[標本準備] 靜脈抽血2ml,不抗凝。
[試劑]
1.微孔板
2.樣品稀釋液
3.酶結(jié)合物
4.陰性對照
5.陽性對照
6.洗滌劑
7.TMB顯色液
8.終止液
[儀器設(shè)備] 酶標儀或全自動酶聯(lián)免疫檢測儀。
[測定步驟]
1.將待檢血清編號,用樣品稀釋液作1:100稀釋。
2.根據(jù)用量取出相應孔數(shù)的微孔板條,其余部分密封后4℃保存。
3.加入已稀釋的待檢血清,陰性對照,陽性對照各100t.tl至反應孔內(nèi),陰性對照、陽性對照設(shè)復孔,設(shè)空白對照1孔(空白孔不加任何試劑),振蕩混勻,37C環(huán)境中溫育1h。
4.棄去孔中液體,用洗滌液洗滌5次,拍干。
5.每孔加入酶標記物100fA,混勻,37℃環(huán)境中水浴1h。
6.棄去孔中液體,用洗滌液洗滌5次,拍干。
7.向每孔加入底物A液和底物B液各2滴,置室溫環(huán)境中10min,每孔再加終止液50ul終止反應。
8.空白對照(只加蒸餾水200g1)校零,在波長450nm處讀取各孔的OD值,凡樣品孔OD大于或等于陰性對照孔 2倍,該樣品即為陽性。
[正常參考值] EBVAb—IgA陰性
[注意事項]
1.使用前試劑盒應預先在室溫環(huán)境中平衡30min。
2.試劑盒在2~8℃避光保存,啟用后應盡快用完。
3.不同批次的試劑組分不能混用。
4.實驗后試劑、血清標本均應視為有傳染性物質(zhì)。
5.用滴瓶滴加時,滴瓶應垂直,用力和速度應均勻;加樣后充分混勻。
[臨床意義] EBVAb-IgM陽性是EBV近期感染的指標,常見于傳染性單核細胞增多癥。該抗體在患者感染不久后就轉(zhuǎn)陽,但通常存在時間較短。
EBVAb—IgA陽性見于鼻咽癌,可用于鼻咽癌療效觀察與預后判斷;也可見于肺癌、甲狀腺癌、慢性鼻咽部炎癥,但陽性率一般不高。正常人也有部分陽性,陽性率約為3.4%。
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