菌種的保存真空冷凍干燥法

1準(zhǔn)備用于真空冷凍菌種保藏的安培管宜采用中性玻璃制造，先用2%鹽酸浸泡8~10h,再經(jīng)自來(lái)水沖洗多次,用蒸餾水涮洗2~3次,烘干;在每管內(nèi)放入打好菌號(hào)及日期的標(biāo)簽,字面朝向管壁,管口塞好脫脂棉塞,121℃下高壓滅菌20分鐘備用。

2準(zhǔn)備菌種用真空冷凍干燥法保藏的菌種用菌種純度要高,而且菌齡要適宜。一般細(xì)菌的菌齡要求24~48h;酵母菌為3d;形成孢子的微生物則宜保藏孢子;放線菌和絲狀真菌菌齡為7~10d。

3保護(hù)劑的選擇和準(zhǔn)備選取新鮮牛奶作為保護(hù)劑,牛奶要先脫脂,用離心方法去除上層油脂,115℃下高壓蒸汽滅菌25min,備用。

4菌種準(zhǔn)備及分裝菌種要求為生長(zhǎng)良好的純種,菌齡以處于穩(wěn)定期為好,孢子是新鮮的。每支長(zhǎng)好的斜面加2~3ml保護(hù)劑,用接種環(huán)將菌苔輕輕刮起。如用液體培養(yǎng)的菌種,則需經(jīng)離心收集和用滅菌生理鹽水洗滌細(xì)胞,收集的菌體用保護(hù)劑懸浮制成菌懸液。

5 預(yù)凍-80℃冰箱預(yù)凍1~2小時(shí)。

6冷凍干燥將冷凍后的樣品安瓿管置于冷凍干燥機(jī)的干燥箱內(nèi),開(kāi)始冷凍干燥,時(shí)間一般為8-20小時(shí)。

7封口抽真空干燥后,取出安培瓶,接在封口用的玻璃管上,可用L形五通管繼續(xù)抽氣,約10min即可達(dá)到26.7Pa(0.2mmHg。于真空狀態(tài)下,以煤氣噴燈的細(xì)火焰在安培管頸中央進(jìn)行封口。

8保藏安瓿管保藏在-20℃冰箱里。