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ADCC簡介

抗體依賴的細胞介導(dǎo)的細胞毒性作用（ADCC，antibody dependent cellular cytotoxicity）是指抗體的Fab段結(jié)合病毒感染的細胞或腫瘤細胞的抗原表位，其Fc段與殺傷細胞（NK細胞、巨噬細胞等）表面的FcR結(jié)合，介導(dǎo)殺傷細胞直接殺傷靶細胞。

活細胞動力學(xué)成像

ADCC的過程

IgG抗體可介導(dǎo)多種殺傷細胞發(fā)揮ADCC作用，其中NK細胞是發(fā)揮ADCC作用的主要細胞。在抗體介導(dǎo)的ADCC作用的發(fā)生過程中，抗體只能與靶細胞上的相應(yīng)抗原表位特異性結(jié)合，而NK細胞等效應(yīng)細胞可殺傷任何已與抗體結(jié)合的靶細胞，抗體與靶細胞上的抗原結(jié)合是特異性的，NK細胞等對靶細胞的殺傷作用是非特異性的。

ADCC的研究方法

活細胞動力學(xué)成像

是時候介紹活細胞動力學(xué)成像法進行ADCC實驗了！

01

成像法原理

通過對靶細胞進行熒光標記，常用染料為活細胞染料Calcein AM。加入效應(yīng)細胞和抗體后，一旦發(fā)生ADCC作用，靶細胞會釋放出Calcein AM染料，細胞內(nèi)熒光變?nèi)?，后續(xù)利用BioTek成像實時觀察靶細胞熒光圖片，并進行量化分析。

區(qū)分靶細胞和效應(yīng)細胞

具體設(shè)置

02

軟件自動分析

Gen5軟件可以自動計算每個樣品孔所有數(shù)據(jù)點的綠色熒光細胞個數(shù)，繼而轉(zhuǎn)化成計算曲線下面積（AUC）。利用以下公式計算ADCC作用。

自動分析曲線下面積

活細胞動力學(xué)成像

03

已經(jīng)有多篇文獻報道成像法用于ADCC檢測，讓我們一起來看看吧。

文獻1

活細胞動力學(xué)成像

眼見為實

活細胞動力學(xué)成像

活細胞動力學(xué)成像

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Time 0為初始圖片，Time 4為四小時后圖片。

其中NK-92_158V細胞為CD16a表達的效應(yīng)細胞，B淋巴細胞為靶細胞。

動力學(xué)VS終點法

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在孵育1小時的樣品組中，動力學(xué)法仍然可以識別出ADCC效應(yīng)，而終點法則很難識別出來。

在孵育4小時的樣品組中，兩種方法的EC50相差無幾。利用動力學(xué)法，可以保證靈敏度的同時，縮短實驗時間。

文獻2

活細胞動力學(xué)成像

多重數(shù)據(jù)

活細胞動力學(xué)成像

活細胞動力學(xué)成像

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NK細胞介導(dǎo)K562細胞溶解

04

ADCC應(yīng)用場景

舉個例子用于篩選單抗、。

已知CD20蛋白為B細胞表面抗原，淋巴瘤、白血病等疾病治療的目標靶點。HER2蛋白廣泛表達于乳腺癌及胃/食管癌。

下圖藍色線為用于CD20表達BJAB細胞（淋巴瘤細胞）；紅色線為用于HER2表達的SKBR3細胞（乳腺癌細胞）。兩種單抗均展示出ADCC作用。

活細胞動力學(xué)成像

活細胞動力學(xué)成像的方法不僅可以應(yīng)用在ADCC實驗中，也適用于檢測CTL（T細胞殺傷實驗）、CDC（補體依賴的細胞毒性作用）和NK細胞殺傷實驗等。

引用文獻：

1. Kamen L, Thakurta T, Myneni S, Zheng K, Chung S. Development of a kinetic antibody-dependent cellular cytotoxicity assay. J Immunol Methods. 2019;468:49‐54. doi:10.1016/j.jim.2019.02.006

2. Fassy J, Tsalkitzi K, Salavagione E, Hamouda-Tekaya N, Braud VM. A real-time digital bio-imaging system to quantify cellular cytotoxicity as an alternative to the standard chromium-51 release assay. Immunology. 2017;150(4):489‐494. doi:10.1111/imm.12702

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