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當(dāng)前位置:上海隱智科學(xué)儀器有限公司>>技術(shù)文章>>C18與C8色譜柱差異及C18色譜柱維護(hù)與污染處理
反相液相色譜中,C18(十八烷基硅烷)與C8(辛基硅烷)是應(yīng)用泛兩款固定相,二者基質(zhì)同為硅膠,僅鍵合烷基碳鏈長(zhǎng)度不同,直接影響保留能力、選擇性,而C18作為主流色譜柱,其壽命、日常維護(hù)與污染處置,直接決定液相檢測(cè)的數(shù)據(jù)穩(wěn)定性。
C18碳鏈更長(zhǎng),烷基為18個(gè)碳,鍵合相碳載量更高,疏水作用更強(qiáng),對(duì)非極性、弱極性化合物保留能力更強(qiáng),適合中等極性至弱極性物質(zhì)分離,如農(nóng)殘、藥物中間體、多組分復(fù)雜樣品,是通用型分析色譜柱。C8碳鏈短,僅8個(gè)碳原子,碳載量偏低,疏水保留弱于C18,同等流動(dòng)相條件下組分出峰更快,適合極性偏大、保留過(guò)強(qiáng)易拖尾的樣品,可縮短分析時(shí)長(zhǎng)。二者選擇性接近,C18峰容量更好,適合復(fù)雜基質(zhì);C8更適合強(qiáng)疏水性樣品出現(xiàn)過(guò)強(qiáng)保留、洗脫困難的場(chǎng)景。
C18色譜柱正常使用壽命,受樣品基質(zhì)、前處理、流動(dòng)相、pH、溫度共同影響。常規(guī)干凈標(biāo)樣體系,合理維護(hù)條件下可進(jìn)樣數(shù)千針;面對(duì)生物樣本、食品、環(huán)境等復(fù)雜基質(zhì),基質(zhì)雜質(zhì)易吸附柱頭,壽命往往僅有幾百針。硅膠基質(zhì)C18通用pH適用范圍多為2?8,pH會(huì)加速硅膠水解,造成鍵合相流失,柱效快速下降。
日常維護(hù)是延長(zhǎng)C18壽命的關(guān)鍵。新柱使用前,按照說(shuō)明書完成活化平衡;流動(dòng)相務(wù)必使用色譜純?cè)噭?,水相需脫氣,緩沖鹽必須過(guò)濾。做完含鹽緩沖鹽體系,必須先用高比例水?有機(jī)相沖洗,沖凈鹽類,禁止鹽溶液直接接觸高有機(jī)相,防止鹽析出堵塞柱頭。樣品盡量做好前處理,采用固相萃取、過(guò)濾等方式去除蛋白、油脂、顆粒物等雜質(zhì)。長(zhǎng)期不用的色譜柱,保存于甲醇或乙腈有機(jī)相中,嚴(yán)禁純水長(zhǎng)時(shí)間封存,避免硅膠相水解損壞。
當(dāng)C18被污染,常見現(xiàn)象為柱壓升高、基線漂移、鬼峰、峰拖尾、柱效下降。污染多為強(qiáng)保留基質(zhì)雜質(zhì)吸附在柱頭。優(yōu)先采用低流速反向沖洗色譜柱(注意確認(rèn)色譜柱支持反沖,部分色譜柱不允許反沖),選用強(qiáng)洗脫溶劑沖洗,甲醇?乙腈?異丙醇依次沖洗,去除強(qiáng)吸附雜質(zhì)。若柱頭污染嚴(yán)重,可小心拆卸柱頭篩板,清理柱頭沉積污染物,更換篩板,注意該操作存在損壞色譜柱風(fēng)險(xiǎn)。
如果沖洗后柱效仍無(wú)法恢復(fù),說(shuō)明鍵合相已不可逆損傷,只能更換色譜柱。實(shí)際檢測(cè)中,建議保護(hù)柱與C18分析柱串聯(lián)使用,攔截樣品雜質(zhì),大幅延長(zhǎng)分析柱使用壽命,降低檢測(cè)成本。
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