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用于紫外可見分光光度計的光度準(zhǔn)確度測試的材料, 應(yīng)該是純度高、穩(wěn)定性好的物質(zhì)。這些物質(zhì)中最主要的是鉻酸鉀( K2 CrO4 , 一般在堿性溶液中)、重鉻酸鉀( K2 Cr2 O7 , 一般在酸性溶液中) 、硝酸鉀、中性濾光片等。在堿性溶液中的鉻酸鉀是一種好材料, 但是因為含有堿性, 不能儲藏在普通玻璃容器中, 而需要儲藏在石英器皿中, 硝酸鉀本身不大穩(wěn)定。這些都限制了它們的使用。因此, 選擇易于純化又溶于酸性介質(zhì)中的物質(zhì), 并且它們的稀溶液也是很穩(wěn)定的。因此, 重鉻酸鉀的0. 005mol/ L H2 SO4 溶液經(jīng)常被使用。許多科學(xué)家認(rèn)為, 用紫外濾光片來測試紫外可見分光光度計的光度準(zhǔn)確度, 具有很大的優(yōu)點。因為它們的穩(wěn)定性更好, 又便于攜帶, 還有許多優(yōu)點將在后面討論。紫外可見分光光度計的光度準(zhǔn)確度測試方法, 目前國內(nèi)外各生產(chǎn)廠家作法不一, 其主要原因是各國的國家標(biāo)準(zhǔn)不同; 如美國國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定: “選擇合適的標(biāo)準(zhǔn)參比材料, 在規(guī)定的波長處, 連續(xù)測10 個吸光度或透射比讀數(shù), 取10個讀數(shù)的平均值, 實際吸光度或透射比與觀測值的平均值之差, 即為光度準(zhǔn)確度"。美國國家標(biāo)準(zhǔn)還規(guī)定了計算光度準(zhǔn)確度的標(biāo)準(zhǔn)偏差S 的方法; 規(guī)定指出吸光度準(zhǔn)確度用AA 表示, 則有式( 4-10) 、式( 4-11) 中, S 為標(biāo)準(zhǔn)偏差; Ai 或T i 為每次測量時吸光度或透射比的讀數(shù)值; Aa 或Ta 為吸光度或透射比的平均值; n 為測量次數(shù)( 一般取5～7 次)。

   美國NBS 規(guī)定, 在可見區(qū)用930 標(biāo)準(zhǔn)片來測定光度準(zhǔn)確度, 其標(biāo)準(zhǔn)透射比值分別為10%、20%、30%的中性玻璃濾光片。規(guī)定還指出也可用NBS 的931 , 它是一種溶液。而在紫外區(qū)內(nèi), 則規(guī)定用NBS 的203 來測定光度準(zhǔn)確度; 它是一種標(biāo)準(zhǔn)透射比值分別為90%、30%、10% 熔融石英濾光片。此外,美國標(biāo)準(zhǔn)還規(guī)定在紫外區(qū)內(nèi), 用戶還可以自己配置高純度的化合物溶液來測定光度準(zhǔn)確度。為此, 美國NBS 已發(fā)布了鉻酸鉀(K2 CrO4 )、重鉻酸鉀( K2 Cr2 O7 )等標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)可供選用。
    我國在1992 年制訂的紫外可見分光光度計國家標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定, 用重鉻酸鉀溶液來測試紫外區(qū)的光度準(zhǔn)確度, 并明確指出了測試波長。在可見光區(qū)規(guī)定可用中性濾光片來檢測光度準(zhǔn)確度, 其標(biāo)準(zhǔn)片的透射比值分別為10%、20%、40%左右; 同時還規(guī)定在紫外可見整個區(qū)間, 都可用中性濾光片來檢測光度準(zhǔn)確度, 其標(biāo)準(zhǔn)片的透射比值也分別為10%、20%、40%左右。
    安徽省計量測試研究所和國家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)研究中心共同研制的紫外光區(qū)透射比標(biāo)準(zhǔn)濾光片, TA 優(yōu)于0. 2% , 穩(wěn)定性優(yōu)于0. 1% , 其測試波長分別為270nm、293 nm 和350 nm, 相應(yīng)的透射比標(biāo)準(zhǔn)值各為11. 4%、3. 9%、52. 9%左右。用來測試日本島津公司的UV-260 紫外可見分光光度計和無錫高速分析儀器廠生產(chǎn)的WFZ-753 型紫外可見分光光度計的光度準(zhǔn)確度, 具體操作時,以空氣作參照, 對規(guī)定的波長處各測7 次, 取其平均值, 與標(biāo)準(zhǔn)值相減, 則得到各規(guī)定的波長處的TA 。而后, 取三個規(guī)定波長中最差者作為被測紫外可見分光光度計儀器的透射比準(zhǔn)確度。再根據(jù)式( 4-2 ) , 求得被測儀器在各規(guī)定的波長處的透射比準(zhǔn)確度, 然后以三個規(guī)定波長中的最差者作為被測儀器的透射比準(zhǔn)確度。
    影響紫外分光光度計光度準(zhǔn)確度的因素很多, 主要因素有雜散光、噪聲、基線平直度、光譜帶寬等, 將在后面討論。